全预混冻干PCR试剂检测草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型的研究

• 作者: 伍建敏 侯月娥 张杰 李中圣 王凤求 王贵平 赵玉林
• 来源期刊: 水产科学
• 学科: 农学
• 关键词: 草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型 冻干试剂 TaqMan荧光定量RT-PCR
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 研究与应用
• 页码范围: 80-85
• 页数: 6页
• 分类号: S948
• 字数: 5390字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16378/j.cnki.1003-1111.2019.01.12

摘要

草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型是导致草鱼出血病的主要病原体之一, 目前在我国广泛流行.本研究根据GenBank中草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型基因序列, 设计了草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型特异性探针和PCR引物, 通过优化反应条件, 建立了草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型一步法TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法.试验对反转录和PCR反应体系进行摸索, 通过优化的冻干工艺制备出草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型全预混RT-PCR试剂, 在荧光定量PCR中, 冻干试剂的检测灵敏度可达10个模板, 是普通PCR的100倍.批次间变异系数小于4％.特异性试验结果表明, 该方法可特异性地检出草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型, 而对鲤春病毒血症病毒、传染性造血器官坏死症病毒无检测信号.该冻干试剂4℃保存12个月, 室温25℃保存3个月, 37℃保存15d, 敏感性仍为10个, 与第1d相同;利用手持单通道荧光PCR仪, 可在42min内完成核酸诊断.本试验基于荧光定量PCR检测方法, 结合核酸扩增体系冻干工艺制备的全预混草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型RT-PCR试剂具有耐保存便于运输、准确性高、仪器拓展性好的特点, 对草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型快速诊断有重要意义.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王贵平		39	107	5.0	7.0
2	李中圣		21	53	4.0	5.0
3	侯月娥		14	51	4.0	6.0
4	伍建敏		8	24	3.0	4.0
5	王凤求		5	7	2.0	2.0
6	赵玉林		3	4	2.0	2.0
7	张杰		2	5	2.0	2.0