原因不明复发性自然流产患者外周血pDC、miR-6165水平变化及其调控机制

• 作者: 周宪宾 尹训强 张云虹 张振 朱肖肖 李霞 王东梅 褚楚 赵霖 郑象昭 郭强 魏然
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 医学
• 关键词: 原因不明复发性自然流产 微小核糖核酸6165 信号传导及转录激活因子3 浆细胞样树突状细胞
• 年，卷（期）: 2019,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 18-22
• 页数: 5页
• 分类号: R392
• 字数: 4266字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2019.02.005

摘要

目的 观察原因不明复发性自然流产 (URSA) 患者外周血中浆细胞样树突状细胞 (pDC) 、微小RNA-6165 (miR-6165) 水平变化, 并探讨二者间的调控机制.方法 选取正常早孕妇女 (正常妊娠组) 和URSA患者 (URSA组) 各30例, 空腹抽取静脉血, 分离单个核细胞 (PBMC) , 流式细胞术测定pDC细胞比例, q PCR法检测miR-6165表达水平;采用Target Scan生物信息软件, 以Target Scan 7. 1程序预测miR-6165与信号传导及转录激活因子3 (STAT3) mRNA的3'非翻译区 (3'UTR) 是否存在潜在结合位点;将293T细胞分为干预组和对照组, 分别同时转染miR-6165 (空白对照NC) 与野生型或突变型STAT3 mRNA 3'UTR荧光素酶报告基因pmir GLO载体, 采用双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶报告基因活性.将293T细胞分为3组, 过表达组、抑表达组利用Lipofectamine2000转染miR-6165 mimics及inhibitor, 空白对照组转染阴性对照引物;转染24 h后收集细胞, 分别采用q PCR、Western blotting法检测各组细胞STAT3 mRNA、STAT3总蛋白及磷酸化水平 (p-STAT3) .结果 与正常妊娠组比较, URSA组PBMC中pDC比例降低而miR-6165表达水平升高 (P均<0. 05) .Target Scan 7. 1程序预测显示, miR-6165与STAT3 mRNA的3'UTR之间具有潜在的碱基互补结合位点;荧光素酶报告基因系统检测显示, 与对照组比较, 干预组能降低野生型STAT3 mRNA 3'UTR荧光素酶报告基因活性 (P <0. 05) , 但对突变型STAT3 mRNA 3'UTR荧光素酶报告基因活性无明显影响 (P> 0. 05) .与空白对照组比较, 过表达组STAT3 mRNA、STAT3与p-STAT3蛋白表达均降低 (P均<0. 05) , 而抑表达组STAT3 mRNA、STAT3与p-STAT3蛋白表达均升高 (P均<0. 05) .结论URSA患者外周血PBMC中pDC比例降低, 而miR-6165表达水平升高; miR-6165与STAT3结合并抑制STAT3表达和功能, 抑制pDC亚群分化, 打破母胎免疫耐受状态进而导致URSA.