猪LPAR3基因克隆及其在子宫内膜细胞的表达

• 作者: 吴龙 廖妙容 张哲 张爱玲 张豪 李加琪 温丽娟 袁晓龙 钟玉宜
• 来源期刊: 华南农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪 LPAR3基因 启动子 子宫内膜 妊娠 甲基化
• 年，卷（期）: 2019,（2）
• 页码范围: 31-39
• 页数: 9页
• 分类号: S813.1
• 字数: 6870字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7671/j.issn.1001-411X.201805013

摘要

[目的]获得猪LPAR3基因完整mRNA及基因结构,研究其启动子活性;探究LPAR3基因在子宫内膜的转录调控及可能影响母猪产仔的机制.[方法]应用5'RACE和3'RACE技术获取LPAR3基因完整mRNA序列;预测5'调控区潜在的启动子转录因子结合位点及CpG岛,构建不同长度的启动子双荧光素酶报告基因重组载体,与pRL-TK质粒共同转染至猪子宫内膜细胞,检测启动子活性;应用RT-qPCR比较LPAR3基因在妊娠第12天的二花脸猪和长大二元猪子宫内膜的相对表达量;应用亚硫酸氢钠修饰后测序比较LPAR3基因在妊娠第12天的二花脸猪和长大二元猪子宫内膜的甲基化状态.[结果]猪LPAR3 mRNA全长为2127 bp,其中5'UTR和3'UTR的长度分别为202和860 bp,CDS区为1065 bp.克隆获得包括LPAR3转录起始位点上游3080 bp(-2430/+650 bp)的5'调控序列,分析预测显示该调控区不存在TATA box,存在GC元件、CPBP及糖皮质激素受体IR3等调控因子结合位点,且在-190/-84和-44/+651 bp处存在2个潜在CpG岛.成功构建9个不同长度的5'缺失报告重组载体并转染猪子宫内膜细胞.双荧光素酶活性检测结果显示,启动子P4(+454/+80 bp)的转录活性最高,其次是P6(-123/+80 bp).RT-qPCR结果显示,妊娠第12天二花脸猪LPAR3基因在子宫内膜的表达量高于在其他组织的表达量,且极显著高于在妊娠第12天长大二元猪子宫内膜的表达量,LPAR3在2个猪种子宫内膜均处于低甲基化状态且差异不显著.[结论]猪LPAR3 mRNA全长为2127 bp,妊娠第12天LAPR3基因在二花脸猪子宫内膜表达高于其在长大二元猪子宫内膜的表达,显示LPAR3可能参与了猪早期妊娠并影响产仔数.