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日本鳗鲡Ⅱ型干扰素基因(IFN-γ和IFN-γrel)的原核表达与纯化研究
日本鳗鲡Ⅱ型干扰素基因(IFN-γ和IFN-γrel)的原核表达与纯化研究
作者:
刘海姿
张婉婷
徐继松
李想
梁英
翟少伟
黄文树
黄贝
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
日本鳗鲡
Ⅱ型干扰素
原核表达
摘要:
分别以日本鳗鲡(Anguilla japonica)pMD19-T-IFNγ和pMD19-T-IFN-γrel重组克隆质粒为模板,采用PCR方法扩增日本鳗鲡IFN-γ和IFN-γrel基因,而后分别将IFN-γ和IFN-γrel成熟肽的编码序列克隆至原核表达载体pQE30和pET32a上,成功构建了重组表达载体pQE30-IFN-γ和pET32a-IFN-γrel.将重组表达载体pQE30-IFN-γ和pET32a-IFN-γrel分别转化入Escherichia coli M15和Escherichia coli BL21感受态细胞进行表达,并优化IPTG诱导表达体系后用SDS-PAGE电泳鉴定IFN-γ与IFN-γrel重组蛋白表达形式.IFN-γ与IFN-γrel重组蛋白经镍柱纯化后进行SDS-PAGE电泳检测和Western blot鉴定.结果 显示,重组表达载体pQE30-IFN-γ与pET32a-IFN-γrel分别在E.coli M15和E.coli BL21中得以正确表达.重组IFN-γ蛋白分子量为21kD左右,表达的融合蛋白以可溶性形式存在;重组IFN-γrel蛋白分子量为31 kD左右,以包涵体形式存在.且两者均在1.0 mmol·L-1 IPTG诱导6h时表达量最高.经镍柱纯化和Western blot检测,成功获得高纯度的IFN-γ和IFN-γrel重组蛋白.建立了日本鳗鲡IFN-γ和IFN-γrel基因的原核表达系统,为进一步研究日本鳗鲡干扰素系统的功能及调控机制奠定了基础.
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篇名
日本鳗鲡Ⅱ型干扰素基因(IFN-γ和IFN-γrel)的原核表达与纯化研究
来源期刊
海洋渔业
学科
农学
关键词
日本鳗鲡
Ⅱ型干扰素
原核表达
年,卷(期)
2019,(5)
所属期刊栏目
研究论文
研究方向
页码范围
567-577
页数
11页
分类号
S917.4
字数
6994字
语种
中文
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日本鳗鲡
Ⅱ型干扰素
原核表达
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研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
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期刊影响力
海洋渔业
主办单位:
中国水产学会
中国水产科学研究院东海水产研究所
出版周期:
双月刊
ISSN:
1004-2490
CN:
31-1341/S
开本:
大16开
出版地:
上海市军工路300号
邮发代号:
4-630
创刊时间:
1979
语种:
chi
出版文献量(篇)
1513
总下载数(次)
2
总被引数(次)
14822
相关基金
福建省自然科学基金
英文译名:
Natural Science Foundation of Fujian Province of China
官方网址:
http://www.fjinfo.gov.cn/fz/zrjj.htm
项目类型:
重大项目
学科类型:
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