人耳软骨细胞冻存复苏后的体外成软骨能力及体内转归的研究

• 作者: 于瑶 刘豫 周广东 曹谊林 李丹 殷宗琦
• 来源期刊: 组织工程与重建外科杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 冻存复苏 人残耳软骨细胞 无支架软骨膜片 可注射软骨
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 137-141
• 页数: 5页
• 分类号: Q813.1+1
• 字数: 4561字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-0364.2019.03.003

摘要

目的 以无支架软骨膜片为模型,研究冻存对人耳软骨细胞的细胞活力、增殖和体外/体内软骨再生能力的影响.方法 将小耳畸形患者术中废弃的残耳软骨,以胶原酶消化、分离,得到原代软骨细胞.将软骨细胞扩增至第1代(P1)后,分为实验组及对照组.实验组(Exp)以含有FBS和DMSO的冻存液,经程控降温仪和液氮冻存1个月后复苏,高密度接种,制备软骨膜片及可注射软骨;对照组(Ctrl)不经冻存继续扩增至第3代(P3),高密度接种,制备软骨膜片及可注射软骨.通过光学显微镜、CCK-8、活/死细胞染色、HE和阿利新蓝染色等,检测细胞形态、活力、增殖能力及软骨特异基质(ECM)的表达能力.通过每组体外软骨膜片的湿重、体积及生化成分定量检测,确定软骨细胞的体外成软骨能力.将每组软骨膜片制成新生软骨颗粒(可注射软骨),注射至裸鼠皮下(n=5),8周后取材,行大体观察、HE染色和生化成分定量检测,比较每组软骨细胞的体内成软骨能力.结果 两组细胞的形态、活力、增殖能力和软骨特异的糖胺聚糖(GAG)形成能力无明显差异.相比对照组,实验组体外再生软骨的湿重及总胶原表达升高;但体内软骨再生能力两组亦无明显差异.结论 细胞冻存复苏对人耳软骨细胞的细胞活力、增殖和体外/体内软骨再生能力无明显影响.