敲除PaLoc毒力岛的无毒性艰难梭菌菌株的构建

• 作者: 吴昌学 崔古贞 洪伟 王义 程玉梅 饶凤琴 齐晓岚
• 来源期刊: 贵州医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 艰难梭菌 CRISPR-Cpf1系统 PaLoc毒力岛 基因敲除 活菌疫苗 毒性基因 梭菌感染 载体 质粒
• 年，卷（期）: 2019,（10）
• 所属期刊栏目: 专题研究
• 页码范围: 1128-1133
• 页数: 6页
• 分类号: R378.8
• 字数: 3620字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19367/j.cnki.1000-2707.2019.10.003

摘要

目的:使用CRISPR-Cfp1系统敲除艰难梭菌毒性(PaLoc)毒力基因岛,构建无毒性艰难梭菌菌株.方法:使用分子克隆方法,构建针对PaLoc毒力岛的基因打靶质粒pWH53;将pWH53质粒转化艰难梭菌630菌株后,诱导Cpf1蛋白表达,PCR筛选发生双交换的PaLoc敲除突变株,测序验证设计位点是否发生等位双交换.结果:PCR结果显示,获得的16株转化子中有8株为敲除PaLoc突变株,阳性率为50％;测序结果显示,获得的8株敲除PaLoc突变株均在设计位点发生了等位双交换.结论:成功构建艰难梭菌毒性毒力岛敲除PaLoc突变株.