金黄色葡萄球菌ymdB基因的克隆表达及生物信息学分析

• 作者: 吴佳艳 夏佳音 李文通 羊晓敏 陈新江
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 医学
• 关键词: ymdB基因 ymdB蛋白 克隆 原核表达 生物信息学 金黄色葡萄球菌
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 215-219
• 页数: 5页
• 分类号: R446.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2019.03.0038

摘要

[目的]克隆、表达金黄色葡萄球菌ymdB基因,并对其编码产物进行生物信息学分析.[方法]以金黄色葡萄球菌ATCC 25923菌株的基因组DNA为模板,用聚合酶链式反应扩增ymdB基因,将扩增基因酶切后与表达载体pET-32a(+)连接,构建重组质粒并转化大肠杆菌TG1,增菌培养后提取质粒,经PCR、基因测序鉴定后,再转化大肠杆菌BI21(DE3),对转化菌株进行诱导后,进行10％ SDS-PAGE分析.使用Protparam、PSORT、CDD、SignalP 4.1、TMpred、NetPhos 3.1 Server、PSIPRED、SWISS-MODEL等软件,分析YmdB蛋白的氨基酸数目、相对分子质量、理论等电点、带电荷氨基酸总数、半衰期、稳定性、疏水性、亚细胞定位、保守结构域、信号肽、跨膜区、磷酸化位点、二级结构、三维结构等.[结果]构建了表达载体pET-32a(+)-ymcdB,在37℃经异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后获得表达.YmdB蛋白由266个氨基酸组成,相对分子质量为30134.53Da,等电点为6.23,正电荷氨基酸总数为33个,负电荷氨基酸总数为35个,在大肠杆菌内的半衰期为10 h以上,是稳定的亲水蛋白质,定位于细胞质中,与YmdB蛋白家族具有相似的保守结构域,没有信号肽,有一个跨膜区和14个磷酸化位点,二级结构中α螺旋、β折叠和无规则卷曲分别占42.11％、9.40％、48.49％,三维空间结构与二级结构预测结果大致相同.[结论]成功克隆、表达了金黄色葡萄球菌ymdB基因,并对YmdB蛋白进行了生物信息学分析,为深入研究该蛋白的分子作用机理打下一定基础.