环糊精水解酶cds1-3底物通道氨基酸的定点突变研究

• 作者: 庞浩 林丽华 汤宏赤 莫莉 郭媛 闭海
• 来源期刊: 广西科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 环糊精水解酶 同源建模 底物通道 定点突变 蛋白结构 氨基酸
• 年，卷（期）: 2019,（4）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 410-416
• 页数: 7页
• 分类号: Q556
• 字数: 4627字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-9164.2019.04.009

摘要

本研究对具有大分子水解能力的环糊精水解酶cds1-3的蛋白结构进行分析,选取底物通道相关氨基酸进行定点突变.通过比较突变酶和野生酶的功能差异,定位决定cds1-3特殊功能的氨基酸.采用sybyl 1.2进行蛋白质底物结合分析,选取和多聚体形成、底物结合以及底物通道相关的氨基酸Glu66、Pro48、Phe289为突变位点,反向PCR构建pSE380/E66G、pSE380/P48H、pSE380/F289A表达质粒并进行表达,获得酶活突变体并与原始酶进行底物特异性比较分析.其结果显示,突变酶E66G降解大分子底物木薯淀粉和支链淀粉的相对酶活力分别提高26.96％和23.15％,而对小分子底物普鲁兰糖的水解能力下降13.14％.因此,cds1-3是一个能水解大分子底物的特殊环糊精水解酶,氨基酸Glu66是cds1-3水解大分子支链淀粉的关键氨基酸之一.