小胸鳖甲胞外铜锌超氧化物歧化酶重组蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

• 作者: 刘小宁 孜拉吉古丽·西克然木 库尔班·吐松 马纪
• 来源期刊: 四川动物
• 学科: 生物学
• 关键词: 小胸鳖甲 胞外铜锌超氧化物歧化酶 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2019,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 387-393
• 页数: 7页
• 分类号: Q78
• 字数: 5882字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11984/j.issn.1000-7083.20190013

摘要

超氧化物歧化酶(SOD)是清除生物体内超氧阴离子自由基的主要抗氧化酶家族.基于原核表达系统,成功表达了拟步甲科Tenebrionidae小胸鳖甲Micordera punctipennis胞外铜锌SOD的重组蛋白(本文定义为Trx-His-MpecCu/Zn-SOD).经Ni2+亲和层析法纯化重组蛋白后,研究了重组蛋白的部分酶学性质.通过足垫加皮下注射法3次免疫小鼠后,分别用ELISA和Western blot的方法检测抗体效价和抗体特异性.结果 表明,重组蛋白主要以包涵体形式存在,纯化后的重组蛋白浓度为1.33 mg· mL-1,酶活力为27.52 U·mg-1.Trx-His-MpecCu/Zn-SOD在25 ～ 45℃具有比较稳定的酶活性,在35℃最高,同时表现出比较广泛的酸碱耐受性(pH3 ～12),最适pH为9.0,表明重组蛋白的酶活性相对比较稳定.蛋白免疫法制备的鼠抗MpecCu/Zn-SOD多克隆抗体滴度高于1∶819 200.Western blot结果显示,该抗体能免疫结合重组蛋白Trx-His-MpecCu/Zn-SOD和小胸鳖甲体内天然MpecCu/Zn-SOD,但不能与黄粉虫Tenebrio molitor的总蛋白结合,说明制备的抗体效价较高且特异性较好.本研究结果为小胸鳖甲ecCu/Zn-SOD功能的深入研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	马纪	新疆生物资源基因工程重点实验室新疆大学生命科学与技术学院	9	32	4.0	5.0
2	孜拉吉古丽·西克然木	新疆生物资源基因工程重点实验室新疆大学生命科学与技术学院	1	0	0.0	0.0
3	库尔班·吐松	新疆生物资源基因工程重点实验室新疆大学生命科学与技术学院	1	0	0.0	0.0
4	刘小宁	新疆生物资源基因工程重点实验室新疆大学生命科学与技术学院	1	0	0.0	0.0