新型Red重组质粒pRO38的构建及Red系统的定向进化

• 作者: 李玉娟 陈伟 陈如意
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: Red重组系统 大肠杆菌 双链重组 单链重组 缺失突变 分子定向进化
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 513-518,524
• 页数: 7页
• 分类号: Q939.9
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2019.06.0084

摘要

[目的]构建新型Red同源重组质粒,对red基因进行分子定向进化,获取高重组效率的red突变基因.[方法]采用PCR的方法扩增不同的功能片断,通过体外同源重组的方法构建Red同源重组质粒pRO38.采用双链重组的实验验证质粒的同源重组功能后,随机突变red基因,通过修复neo缺失突变的方法筛选具有高重组效率的red基因突变质粒库.[结果]构建了长为5 593 bp的pRO38质粒,pRO38质粒具备正常的重组功能,可以有效地将kan-sacB片段插入大肠杆菌染色体.对pRO38中的red基因进行随机突变后,获得了约60个成功修复了neo缺失突变的菌落,而原始的pRO38质粒则无菌落生长.[结论]构建了新型的Red同源重组质粒.通过定向进化的手段,成功获得了高重组效率的red突变基因库,为从根本上提高Red重组效率打下了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李玉娟		2	0	0.0	0.0
2	陈如意		2	0	0.0	0.0
3	陈伟		4	1	1.0	1.0