HA标签的水稻水孔蛋白OsPIP2;7基因植物双元表达载体构建及转基因水稻的获得

• 作者: 孙林静 孙玥 张融雪 李军玲 王晓静 苏京平 闫双勇
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 水稻 水孔蛋白 HA标签 蛋白表达
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·生物技术
• 页码范围: 59-64
• 页数: 6页
• 分类号: Q785
• 字数: 5493字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7668/hbnxb.201750580

摘要

为研究水稻水孔蛋白OsPIP2;7基因在非生物胁迫中的生物学功能,根据OsPIP2;7基因序列设计特异性引物,以水稻品种中花11的三叶龄叶片RNA反转录的cDNA第一链为模板,克隆OsPIP2;7.采用嵌套PCR的方法,将3×HA标签的碱基序列连接在去除终止子OsPIP2;7基因序列的3′端,然后将此核酸片段插入到植物双元表达载体pHB中,构建pHB-OsPIP2;7-3×HA载体.以中花11成熟胚愈伤组织为材料,采用农杆菌介导的方法进行遗传转化,经过在含有潮霉素的培养基上筛选和分化,获得阳性转化子.提取转基因植株的DNA,进行潮霉素阳性植株的筛选.将阳性植株进行RNA表达检测,获得OsPIP2;7基因表达量上升的转基因阳性植株.为了检测转基因植株中OsPIP2;7蛋白的表达情况,提取OsPIP2;7基因表达上升的转基因植株膜蛋白后,用HA抗体进行杂交的Western-blot检测结果显示,OsPIP2;7-HA蛋白在转基因阳性植株体内过量表达.获得的过表达OsPIP2;7转基因新材料,将为研究OsPIP2;7基因的生物学新功能提供试验基础.