非洲爪蛙Klf4基因新转录本的克隆及功能研究

• 作者: 刘晨 刘浩 徐西兵 曹青
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: Klf4 转录本 非洲爪蛙 早期胚胎发育
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 519-524
• 页数: 6页
• 分类号: Q132.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2019.06.0085

摘要

[目的]克隆非洲爪蛙Klf4基因的新转录本,并研究其在早期胚胎发育中的功能.[方法]提取胚胎总RNA,反转录构建cDNA文库.从Xenbase数据库中获得Klf4的基因组序列,分析序列发现新的ATG位点,设计引物、PCR扩增,将扩增的目的片段插入pCS2+,插入位点为EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ.经双酶切和测序鉴定,发现载体中插入的目的片段为编码483个氨基酸的Klf4的新转录本.体外转录获得mRNA,显微注射入胚胎,进行表型分析以及原位杂交检测.[结果]成功克隆出了Klf4基因的新转录本;过表达该转录本,表型分析发现胚胎发育异常,原位杂交检测发现Xag2和Dkk1的表达上升.[结论]成功克隆编码483个氨基酸的Klf4基因的新转录本,过表达该转录本胚胎发育异常,Xag2和Dkk1的表达被激活.