p115RhoGEF/RhoA信号通路在高糖致脑微血管内皮细胞通透性异常中的作用

• 作者: 朱晨笛 蔡倩 郭慕真 黄敏
• 来源期刊: 营养学报
• 学科: 医学
• 关键词: 糖尿病血管病变 血脑屏障 脑微血管内皮细胞 p115RhoGEF/RhoA信号通路
• 年，卷（期）: 2019,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 154-162
• 页数: 9页
• 分类号: R151.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0512-7955.2019.02.011

摘要

目的 探讨p115RhoGEF/RhoA信号通路在高浓度葡萄糖(Glucose)致小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3)通透性异常中的作用.方法 体外培养小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3),构建单层血脑屏障体外模型.通过ESR电阻仪测定跨内皮细胞间电阻(TEER),分光光度法检测碱性磷酸酶(ALP)、Y-谷胺酞胺转移酶(γ-GT)活性以评估其屏障功能;对照组(5.6 mmol/L葡萄糖)、高糖诱导组(15.6、25.6、35.6、45.6 mmol/L葡萄糖)处理细胞48h,MTT检测细胞相对存活率,分光光度法检测培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)活性,免疫印迹法(Western blot)检测紧密连接蛋白ZO-1、Occludin表达水平,评估高糖对脑微血管内皮细胞通透性的影响;Western blot检测不同浓度葡萄糖处理细胞后p115RhoGEF蛋白表达水平,体外蛋白与蛋白结合试验(Pull-Down)检测RhoA活性.转染p115RhoGEF-siRNA建立p115RhoGEF基因沉默的bEnd.3细胞模型,检测不同处理组RhoA活性及p115RhoGEF、TJ蛋白表达水平.结果 细胞TEER值随培养时间延长逐渐升高,ALP、γ-GT活力均随时间延长逐渐升高;与对照组比较,35.6、45.6mmo/L葡萄糖诱导组的细胞活力出现明显下降作用,且诱导时间越长,细胞存活率越低(P＜0.05);35.6mmol/L葡萄糖诱导组的LDH水平明显升高(P＜0.05);随着葡萄糖浓度升高,ZO-1、Occludin蛋白表达下降而p115RhoGEF蛋白表达升高,差异有统计学意义(P＜0.05);Pull-down结果显示,25.6、35.6mmol/L葡萄糖组的RhoA活性较对照组明显升高(P＜0.05).细胞转染p115RhoGEF-siRNA后,p115RhoGEF蛋白表达较对照组明显下降;高糖诱导48h后,与NC siRNA组比较,p115RhoGEF-siRNA组的GTP-RhoA活性下降、ZO-1、Occludin表达水平明显上调(P＜0.05).结论 高糖通过诱导p115RhoGEF/RhoA信号通路活化,下调紧密连接蛋白表达,引起脑微血管内皮细胞通透性增加.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄敏	宁夏医科大学公共卫生与管理学院	28	53	3.0	6.0
2	蔡倩	宁夏医科大学公共卫生与管理学院	19	49	5.0	6.0
3	朱晨笛	宁夏医科大学公共卫生与管理学院	4	2	1.0	1.0
4	郭慕真	宁夏医科大学公共卫生与管理学院	4	2	1.0	1.0