六种核酸提取试剂盒对粪样中小鼠肝炎病毒核酸提取效率的比较

• 作者: 俞利平 宋晓明 戴方伟 杜江涛 杨伟伟 桂飞
• 来源期刊: 实验动物科学
• 学科: 医学
• 关键词: 小鼠肝炎病毒 病毒RNA提取 TaqMan探针 实时荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 31-35
• 页数: 5页
• 分类号: R115
• 字数: 3580字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-6179.2019.01.007

摘要

目的 比较六种商品化试剂盒在小鼠粪便中提取小鼠肝炎病毒(MHV)RNA的效率,筛选出效率高、耗时短的核酸提取方法.方法 采集感染MHV小鼠的新鲜粪便样本,分别用液氮研磨法、磁珠匀浆法以及PBS溶解离心法进行处理,通过同一核酸提取试剂盒比较病毒核酸提取效率,明确最佳样本前处理方法;之后,用6种试剂盒进行RNA提取,经反转录后进行TaqMan实时定量PCR检测,以Ct值评价6种试剂盒的提取效率,结合产物测序和血清抗体ELISA结果,筛选MHV的最佳核酸提取方法.结果 对于粪便样本的前处理,液氮研磨法的RNA提取效率显著高于磁珠匀浆法.对于6种试剂盒的提取效果,TIANGEN DP422[总RNA浓度:(549.70±52.38) ng/μL,Ct值:(24.51±0.10)]核酸提取效率最高;TIANGEN SD101[总RNA浓度:(274.13±6.87) ng/μL,Ct值:(2.39±0.017)]和QIAGEN 52904[总RNA浓度:(288.13±15.11) ng/μL,Ct值:(2.40±0.012)]用时最短;XS VRL[总RNA浓度:(348.80±15.85) ng/μL,Ct值:(24.70±0.13)]操作最为方便.结论 粪便样本前处理建议采用液氮研磨法.针对粪便中MHV RNA的提取,TIANGEN DP422提取效率最高,推荐用于小鼠肝炎病毒的分子生物学检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	戴方伟	浙江省医学科学院实验动物中心	29	87	5.0	7.0
2	杜江涛	浙江省医学科学院实验动物中心	8	9	2.0	2.0
3	俞利平	杭州师范大学实验动物中心	17	168	8.0	12.0
4	宋晓明	杭州师范大学实验动物中心	6	10	2.0	3.0
5	杨伟伟	杭州师范大学实验动物中心	5	5	1.0	2.0
6	桂飞	杭州师范大学实验动物中心	3	0	0.0	0.0