裸鼹鼠海马神经元纯化模型建立及其低氧耐受特性机制的初步研究

• 作者: 冯延 刘攀 孙伟 崔淑芳 李壘辰 李煜 杨文静 林丽芳 许月榕
• 来源期刊: 实验动物与比较医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 裸鼹鼠 海马 神经元 低氧
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 所属期刊栏目: 裸鼹鼠研究专题
• 页码范围: 467-472
• 页数: 6页
• 分类号: Q95-33
• 字数: 4485字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2019.06.008

摘要

目的 建立一种裸鼹鼠海马神经元的纯化培养方法,并初步探讨其低氧耐受特性.方法 收集妊娠60～65 d裸鼹鼠胚胎海马组织内的细胞,利用含有Neurobasal+2％B27+10 μtmol/L5-氟尿嘧啶的培养基进行神经元纯化,海马神经元维持培养基为含有体积分数2％B27的Neurobasal培养基.体外贴壁培养6～7d,采用倒置显微镜观察细胞的生长状态,利用神经元特异核蛋白(NeuN)抗体进行鉴定.利用CCK8试剂盒进行海马神经元低氧耐受功能的研究(低氧浓度为8％).利用QPCR检测海马神经元中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在低氧情况下的表达水平.结果 通过本方法获得的海马神经元具有典型的神经元形态特征,免疫细胞化学染色显示纯化所得的细胞均呈NeuN阳性,低氧条件下细胞存活率、轴突长度显著大于常氧情况下的数值,低氧情况下裸鼹鼠海马神经元中HIF1α显著高于常氧情况,上述结果差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论 建立了一种简单实用的体外分离培养裸鼹鼠海马神经元的方法,初步揭示了裸鼹鼠海马神经元低氧耐受特性,并且该特性与裸鼹鼠海马神经元于低氧情况下高表达HIF1α有关.