刺五加苷诱导大鼠间充质干细胞成骨分化的作用

• 作者: 周琴 崔向荣 朱静 田杰 颜亮 黄月 龙春兰
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 刺五加苷 成骨分化 骨髓间充质干细胞
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 215-221
• 页数: 7页
• 分类号: Q813.1
• 字数: 5110字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11855/j.issn.0577-7402.2019.03.05

摘要

目的 探讨刺五加苷诱导大鼠间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的作用.方法 提取SD大鼠的BMSCs,培养3代后采用流式细胞术鉴定表面抗原CD45、CD29、CD90的表达;在经典成骨培养液中加入不同浓度的刺五加苷而分为9组:A组(1×10-4mol/L),B组(1×10-5mol/L),C组(1×10-6mol/L),D组(1×10-7mol/L),E组(1×10-8mol/L),F组(1×10-9mol/L),G组(1×10-10mol/L),H组(经典成骨组),Ⅰ组(阴性对照组).采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖能力,反转录定量PCR(RT-qPCR)检测骨形成蛋白(BMP)表达情况,筛选出刺五加苷的最佳诱导浓度.以最佳诱导浓度培养12d后,RT-qPCR检测成骨分化相关基因Runt相关转录因子(RUNX)、成骨细胞特异性转录因子(OSX)、骨涎蛋白(BSP)、骨钙素(OCN)的mRNA表达水平,Western blotting检测Notch跨膜受体蛋白1(Notch1)、毛发增强分裂蛋白(Hes1)的蛋白表达水平;第21天时行矿化钙结节茜素红染色.结果 第3代BMSCs表面抗原符合干细胞鉴定标准.CCK-8检测结果显示,A、B两组在培养120h后明显抑制了BMSCs的增殖,后期培养中将舍弃A、B两组;而RT-qPCR结果显示,添加有刺五加苷的C～G组中,E组BMP表达量最高(4.91±0.46),因此选择1×10-8mol/L作为刺五加苷的最佳诱导浓度进行后续实验.RT-qPCR检测结果显示,E组OSX表达量(30.72±1.96)明显高于Ⅰ组(1.02±0.27)和H组(9.99±0.59,P＜0.05),BSP表达量(8.15±0.47)高于Ⅰ组(1.09±0.31)和H组(6.03±0.8,P＜0.05),OCN表达量(5.91±0.68)高于Ⅰ组(1.18±2.91)和H组(3.05±0.53,P＜0.05),RUNX表达量(1.99±0.09)虽高于Ⅰ组(1.02±0.19),却低于H组(2.51±0.06,P＜0.05).Western blotting检测结果显示,E组成骨诱导后Notchl表达量(4608±103)较Ⅰ组(2638±308)高,却低于H组(5218±182,P＜0.05),Hesl表达量(8885±17)较Ⅰ组(6241±461)增高,却低于H组(12 289±629,P＜0.05).茜素红染色结果显示刺五加苷浓度为10-8mol/L时矿化钙结节多于经典成骨组,提示该浓度刺五加苷成骨诱导效果较经典成骨组更佳.结论 刺五加苷能协同地塞米松促进BMSCs的成骨分化,其作用可能与Notch通路有关.