肝癌实质细胞及肿瘤相关成纤维细胞分离培养方案的优化

• 作者: 刘学民 刘鹏 向俊西 吕毅 张谞丰 李青山 杨丽斐 田波彦 郑幸龙
• 来源期刊: 中华肝脏外科手术学电子杂志
• 关键词: 癌,肝细胞 成纤维细胞 培养技术
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 265-269
• 页数: 5页
• 字数: 4481字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3877/cma.j.issn.2095-3232.2019.03.020

摘要

目的 分离培养人原发性肝癌(肝癌)实质细胞及肿瘤相关成纤维细胞(CAF),并检测其生物学特性.方法 标本来源于2015年9月至2016年10月西安交通大学第一附属医院15例肝癌患者手术切除新鲜肝癌组织.其中男12例,女3例;年龄28～64岁,中位年龄45岁;肝细胞癌13例,胆管细胞型肝癌2例.患者均签署知情同意书,符合医学伦理学规定.采用胶原酶消化法分离培养人原代肝癌细胞及CAF.倒置显微镜下观察肝癌实质及CAF的形态特征.CCK-8法测定细胞活性,免疫荧光鉴定肝癌细胞标志物AFP及CAF标志物波形蛋白(Vimentin)表达.结果 原代肝癌实质细胞培养成功率为2/15,CAF培养成功率为11/15,均为肝细胞癌.肝癌实质细胞为上皮样细胞,铺路石样分布.CAF为长梭形或多角形,呈"鱼群样"分布.肝癌细胞与CAF生长状态良好,增殖活跃,呈对数型生长,CAF的增殖能力略强于肝癌细胞.免疫荧光染色显示原代肝癌细胞质中AFP染色阳性,CAF中Vimentin蛋白表达阳性.结论 采用胶原酶消化法可以成功获得高增殖活性的人原代肝癌实质细胞及CAF.