高通量DNA快速提取方法及其在柞蚕微孢子虫分子诊断中的应用

• 作者: 何龙 叶博 岳冬梅 张波 徐亮 李佩佩 李树英 王晓燕 王林美 米锐 范琦 赵振军
• 来源期刊: 蚕业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 高通量 DNA提取 柞蚕微孢子虫 分子诊断 高灵敏度
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 691-698
• 页数: 8页
• 分类号: S884.2+1|S852.72+3
• 语种: 中文
• DOI: 10.13441/j.cnki.cykx.2019.05.009

摘要

针对柞蚕微孢子虫分子检测受限于繁琐的DNA提取而局限于实验室使用的瓶颈问题,以成本较低的碱裂解法结合磁珠抽提,建立了一种全程在96孔板上使用排枪操作的高通量DNA提取方法(HT提取),对比HT-冻融法和HT-SDS法2种裂解方法获得的DNA在常规PCR与荧光定量PCR(qPCR)中的检测下限,并进行微粒子病筛查的应用.结果 表明,HT提取法与传统方法相比,无繁琐预处理,操作快速、通量高,污染低、抗干扰、提取DNA品质好,主要耗材能重复使用,可自动化,人力物力成本较低;HT-SDS法具有更稳定的裂解效果,获得的DNA用于常规PCR、qPCR检测下限可达4.5和0.045个/μL;HT-冻融法在常规PCR与qPCR中的检测下限为45和0.45个/μL,而传统抽提方法的常规PCR检测下限仅为110个/μL.结合HT-SDS法和qPCR,对3 000个样品进行微粒子病筛查,结果显示,其检测灵敏度显著高于现行镜检技术,最高高出近11倍,且对低带毒品种优势尤为显著,有望实现在柞蚕种茧微粒子病检疫及柞蚕种质资源保护中的应用,促进柞蚕业发展.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐亮		13	1	1.0	1.0
2	何龙		4	4	1.0	2.0
3	李佩佩		3	0	0.0	0.0
4	岳冬梅		1	0	0.0	0.0
5	叶博		2	0	0.0	0.0
6	赵振军		2	0	0.0	0.0
7	米锐		2	0	0.0	0.0
8	张波		1	0	0.0	0.0
9	王林美		1	0	0.0	0.0
10	王晓燕		1	0	0.0	0.0
11	李树英		1	0	0.0	0.0
12	范琦		2	0	0.0	0.0