贵州黑山羊 GFI1B基因的原核表达、蛋白纯化及多克隆抗体制备

• 作者: 储双凤 朱方超 杨章平 毛永江 罗卫星 蔡惠芬 陈志
• 来源期刊: 扬州大学学报（农业与生命科学版）
• 学科: 农学
• 关键词: 贵州黑山羊 GFI1B基因 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 页码范围: 76-81,92
• 页数: 7页
• 分类号: S827
• 语种: 中文
• DOI: 10.16872/j.cnki.1671-4652.2019.06.013

摘要

独立生长因子 1(GFI1)及其同源物 GFI1B是造血所需的谱系特异性转录因子,定位到人类基因组的 9号染色体(9q34.13).编码一种 331个氨基酸的多肤.GFIl和 GFIlB均有 6 个 C末端 C2H2铸指和 1 个 N末端 SNAG(SNAIL/GFI1)转录抑制结构域.为进一步探索 GFI1B的基因功能,公开一种贵州黑山羊新基因 GFIlB多克隆抗体的制备方法,将在实验室中克隆的山羊 GFI1B基因序列首先用于在原核载体中表达,并进行原核表达载体 pET32a-GFI1B的构建,再进行 GFI1B蛋白的原核表达,最后进行 GFI1B蛋白的纯化和大白兔 GFI1B多克隆抗体的制备与纯化.结果表明:高效表达了原核表达载体 pET32a-GFIlB.纯化的 His-GFIlB融合蛋白可满足制备多克隆抗体的要求; ELISA检测结果显示,GFI1B多克隆抗体可与 His-GFI1B融合蛋白进行特异性结合,制备出高度特异的山羊 GFI1B多克隆抗体.该方法获得的多克隆抗体效价高、特异性好,弥补了 GFl1B羊上的多克隆抗体的研究空白.