换锦花LsMYB5基因的克隆与表达分析

• 作者: 侯朔 童再康 高燕会
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 换锦花 原核表达 换锦花R2R3-MYB转录因子5基因(LsMYB5) 表达分析
• 年，卷（期）: 2019,（12）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 2164-2174
• 页数: 11页
• 分类号: S682.2
• 字数: 6720字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2019.12.008

摘要

换锦花(Lycoris sprengeri)属石蒜科石蒜属多年生草本植物,花色为红蓝复色,是良好的鲜切花、盆花、地被和园林造景材料,具有很高的商业价值.为丰富培育花色多样的换锦花品种,本研究以换锦花花瓣转录组信息为基础,采用反转录-PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)和cDNA末端快速扩增(rapid-amplification of cDNA ends,RACE)技术相结合成功克隆了长871 bp的换锦花R2R3-MYB转录因子5基因(R2R3-MYB transcription factor 5 gene,LsMYB5)cDNA序列(GenBank No.MK779710),开放阅读框681 bp,编码226个氨基酸,LsMYB5蛋白C端含有保守的乙烯类响应元件结合因子相关的两亲性抑制(ethylene-responsive element binding factor-associated amphiphilic repression,EAR)抑制结构域(pdLNLD/ELxiG/s)和锌指结构域(CX-(1-2)CX-(7-12)CX-(1-2)C),可能具有转录抑制功能.qRT-PCR分析表明,LsMYB5基因具组织特异性表达,主要在叶片中表达;在花瓣的凋谢期的表达量最高,在颜色不同的无性系中表达量具有显著性差异(P<0.05),推测LsMYB5的表达与换锦花花色形成有关.为了进一步分析LsMYB5基因功能,本研究构建了原核表达载体pET-30(a)-LsMYB5,转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3),成功获得异丙基硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalactoside,IPTG)诱导的表达重组蛋白,并进行了His标签蛋白纯化.该研究结果可为进一步研究LsMYB5转录因子调控的换锦花花色形成相关结构基因的筛选提供理论依据.