海栖热袍菌耐热葡聚糖内切酶EG12B基因的克隆表达及酶学特性分析

• 作者: 任艳艳 张涛 王令 王珊珊 路宏朝
• 来源期刊: 家畜生态学报
• 学科: 农学
• 关键词: 海栖热袍菌 葡聚糖内切酶 克隆表达 酶学特性 饲料添加剂
• 年，卷（期）: 2019,（4）
• 所属期刊栏目: 科学研究
• 页码范围: 20-26
• 页数: 7页
• 分类号: S811.5
• 字数: 6357字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-1182.2019.04.004

摘要

为了促进家畜对纤维素饲料的消化吸收,提高饲料利用率,改善畜产品品质,本研究基于海栖热袍菌(Thermotoga maritima)的基因组信息,通过筛选获得一段具有潜在耐热特性的葡聚糖内切酶基因(EG12B)序列.经删除预测信号肽和优化密码子偏好性,运用基因工程手段将成熟肽EG12B基因克隆至原核表达载体pET-28a中,成功构建了重组表达质粒pET28-EG12B.转化至大肠杆菌BL21 (DE3)感受态细胞中,经重组菌发酵培养及IPTG诱导表达,实现了EG12B在大肠杆菌系统中的胞内高效表达,表达量约占全细胞总蛋白的36％.通过细胞超声破碎、镍离子亲和层析以及热处理分离纯化,获得了电泳纯重组酶EG12B.酶学特性分析表明,该重组酶的最适反应温度为90℃,最适反应pH为5.2,在70℃下保温1h,酶活力基本维持不变.表明葡聚糖内切酶EG12B具有优越的耐热性和良好的热稳定性,为进一步作为饲料添加剂用于纤维素饲料关键技术的开发和畜产品品质的提升奠定了理论基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	路宏朝	陕西理工大学生物科学与工程学院	53	201	8.0	12.0
2	张涛	陕西理工大学生物科学与工程学院	91	350	9.0	13.0
3	王令	陕西理工大学生物科学与工程学院	24	31	4.0	4.0
4	任艳艳	陕西理工大学生物科学与工程学院	1	0	0.0	0.0