斑马鱼中骨形态发生蛋白2a敲降对骨代谢的影响

• 作者: 姜宇 徐又佳 朱国兴 王亮
• 来源期刊: 中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 斑马鱼 吗啉环反义寡核苷酸 骨形态发生蛋白2a 骨形成
• 年，卷（期）: 2019,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 165-171
• 页数: 7页
• 分类号: R681
• 字数: 3960字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-2591.2019.02.010

摘要

目的 通过显微注射吗啉环反义寡核苷酸(morpholino oligo,MO),使斑马鱼骨形态发生蛋白2a(bone morphgenetic protein 2a,BMP2a)基因敲降,观察BMP2a基因表达抑制后对斑马鱼骨代谢的影响.方法以受精后半小时斑马鱼受精卵为模型,将MO显微注射到受精卵(20个,对照组相同处理),对注射MO后及野生型(wild type,WT)的幼鱼于第9天分别进行茜素红染色,比较硬骨的形态差异,同时运用ImageJ软件对染色体积进行统计,比较差异.对注射MO后的幼鱼于第4天提取的cDNA采用实时荧光定量PCR(QPCR)方法检测Runx2a、Runx2b、Sp7、Alp骨形成相关基因和WT基因组的成骨下游基因表达的差异.对注射MO后第4天的斑马鱼予以成骨代表性的两个基因Runx2a进行原位杂交,比较WT幼鱼相关成骨基因表达部位的差异和信号强弱.结果与WT染色相比,注射抑制BMP2a的MO后第9天斑马鱼硬骨茜素红染色变浅,体积更小(MO vs.WT:3276±153 vs.4768±231,P<0.05).QPCR检测显示,注射MO后第4天的斑马鱼成骨代谢基因表达量与WT斑马鱼对应基因相比均下调(Runx2a:0.348±0.002 vs.1.007±0.032;Runx2b:0.525±0.021 vs.1.013±0.021;Sp7:0.483±0.026 vs.1.124±0.173;Alp:0.136±0.012 vs.1.233±0.237;P<0.05).就Runx2a原位杂交而言,注射MO后第4天斑马鱼信号表达弱于同期WT斑马鱼.结论通过基因敲降技术使得斑马鱼BMP2下调,直观地观察到斑马鱼的骨发育迟缓,运用分子手段发现其基因下调造成一系列的成骨基因降低,用原位半定量方法靶向定位到斑马鱼蝶骨上,基因下调后造成斑马鱼的蝶骨信号消失.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐又佳	苏州大学附属第二医院骨科	260	1688	20.0	25.0
2	王亮	苏州大学附属第二医院骨科	44	203	8.0	12.0
3	朱国兴	南京医科大学附属无锡市第二人民医院骨科	41	146	7.0	10.0
4	姜宇	南京医科大学附属无锡市第二人民医院骨科	16	42	4.0	6.0