柱前衍生-液质联用法测定过氧化物还原酶2模拟肽中Asp外消旋化研究

• 作者: 张欣然 李博 英语佳 谢文敏 高准
• 来源期刊: 中南药学
• 学科: 医学
• 关键词: 柱前衍生 液质联用 外消旋化 天冬氨酸
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 691-695
• 页数: 5页
• 分类号: R3411
• 语种: 中文
• DOI: 10.7539/j.issn.1672-2981.2019.05.011

摘要

目的 建立了一种柱前衍生-液质联用测定过氧化物还原酶2 (Prx2)模拟肽中天冬氨酸(Asp)外消旋化的方法,测定不同pH条件下,天冬氨酸外消旋化速率常数.方法 采用6.0 mol·L-1盐酸水解八肽,水解液减压干燥至干,加水溶解,以L-2-氨基丁酸为内标物,GITC为柱前衍生试剂,在pH 11.0碳酸氢钠溶液中衍生化.色谱条件:分离柱为YMC-PACK ODS-AQ (4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为5％冰醋酸溶液(A)和乙腈-甲醇(90:10)(B),梯度洗脱(0～22min,20％～27.5％B;22～22.01 min,27.5％～95％B;22.01～27 min,95％B;27～27.01 min,95％～20％B;27.01～30 min,20％B), 流速为1 mL· min-1;质谱条件:采用电喷雾离子源及正离子单离子监测模式(SIM)定量,天冬氨酸GITC衍生化物m/z 523,内标GITC衍生化物m/z 493.结果 D/L-Asp质量浓度在1.010～200.2 μg·mL-1时,其峰面积与内标物峰面积的比值和氨基酸的质量浓度之间的线性关系良好(r＞ 0.999),最低定量限(LLOQ)为1.010 μg·mL-;LLOQ、低、中和高浓度(LQC、MQC和HQC)日内和日间精密度RSD分别为0.98％～9.7％、3.3％～10.9％,加样回收率为100.2％～108.1％.在pH 3.0～10.0,天冬氨酸外消旋化的速率常数为0～6.24×10-4·d-1.结论 该方法准确、快速,可用于Prx2中D/L-Asp检测.