氧化损伤对视网膜色素上皮细胞三联组氨酸核苷结合蛋白1(HINT1)表达的影响

• 作者: 冯俊侨 吴昌睿 周圆 尹悦 张玮 杨敏 蔡嘉慧 马乐
• 来源期刊: 眼科新进展
• 学科: 医学
• 关键词: 过氧化氢 视网膜色素上皮细胞 凋亡 三联组氨酸核苷结合蛋白1
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 17-21
• 页数: 5页
• 分类号: R774
• 字数: 3789字
• 语种: 中文

摘要

目的 探讨过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)诱导人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞氧化损伤对三联组氨酸核苷结合蛋白1(histidine triad nucleotide binding protein 1,HINT1)表达的影响.方法 将人ARPE-19细胞系分别用0 μmol·L-1H2O2(对照组)、50 μmol·L-1H2O2、100 μmol·L-1H2O2、200 μmol·L-1H2O2、400 μmol·L-1H2O2、600 μmol·L-1H2O26个浓度梯度处理.采用Live／Dead荧光双染法和MTT法分别检测细胞活力和增殖能力;采用Western blot检测RPE细胞内BAX、BCL-2以及HINT1的表达水平.结果 H2O2处理6 h后,对照组及50 μmol·L-1、100 μmol·L-1、200 μmol·L-1、400 μmol·L-1及600 μmol·L-1H2O2组 RPE细胞死亡率分别为(0.35 ± 0.11)%、(2.03 ± 0.87)%、(3.76 ± 1.41)%、(12.17 ±1.26)%、(17.69 ±2.24)%、(25.22 ±0.59)%,RPE细胞死亡率呈剂量依赖性升高(P＜0.05).H2O2作用后对照组及50 μmol·L-1、100 μmol·L-1、200 μmol·L-1、400 μmol·L-1、600 μmol·L-1H2O2组RPE细胞生存率分别为(40.72 ± 2.71)%、(37.75 ± 0.62)%、(35.30 ± 0.68)%、(34.10 ± 0.74)%、(33.61 ± 0.71)%、(31.05 ± 1.41)%,RPE细胞增殖明显减少(P＜0.05),具有剂量-效应关系.随着H2O2浓度的增加,BAX蛋白表达逐渐上升(P＜0.01),而抗凋亡BCL-2蛋白表达则逐渐下降(P＜0.01),BAX／BCL-2比值相比对照组分别升高1.85倍(50 μmol·L-1H2O2组)、2.35倍(100 μmol· L-1H2O2组)、2.86倍(200 μmol·L-1H2O2组)、3.97倍(400 μmol·L-1H2O2组)、8.50倍(600 μmol·L-1H2O2组);HINT1在H2O2处理的RPE细胞中以剂量依赖性方式逐渐下降(P＜0.01),分别下降0.78倍(50 μmol·L-1H2O2组)、0.59倍(100 μmol·L-1H2O2组)、0.45倍(200 μmol·L-1H2O2组)、0.42倍(400 μmol·L-1H2O2组)、0.38倍(600 μmol·L-1H2O2组).结论 H2O2氧化损伤诱导RPE细胞活力显著减弱,细胞凋亡相关蛋白BAX表达升高;同时,细胞中HINT1表达下调,表明HINT1可能通过影响细胞凋亡参与年龄相关性黄斑变性的发生,为其药物作用的潜在靶点.