一种有效的嗜热真菌杜邦嗜热菌靶向基因替代系统

• 作者: 何佳宁 牛雪梅
• 来源期刊: 菌物学报
• 关键词: 嗜热真菌 杜邦嗜热菌 原生质体转化 基因敲除 生物合成基因
• 年，卷（期）: 2019,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 230-241
• 页数: 12页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13346/j.mycosystema.180211

摘要

以嗜热真菌杜邦嗜热菌Thermomyces dupontii NRRL 2155为研究材料,利用同源重组原理和真菌原生质体转化方法,以潮霉素抗性基因替换嗜热真菌目标基因,获得抗潮霉素的靶向基因敲除突变菌株.优化的遗传转化体系为:用15mg/mL裂解酶,在28℃下酶解2g杜邦嗜热菌菌丝5.5h以获得原生质体,经STC缓冲液洗涤重悬后,利用PEG(polyethylene glycol)介导的遗传转化方式,将10μg线性敲除全长片段转化至杜邦嗜热菌原生质体中,通过潮霉素筛选及PCR验证得到基因替换突变菌株,同源重组率达到20％.本研究首次将原生质体转化方法应用在杜邦嗜热菌,并成功建立稳定高效的基因替换体系,为快速构建杜邦嗜热菌的遗传转化体系和研究该嗜热真菌的基因功能提供有效方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	何佳宁	云南大学省部共建云南生物资源保护与利用国家重点实验室	1	1	1.0	1.0
2	牛雪梅	云南大学省部共建云南生物资源保护与利用国家重点实验室	2	1	1.0	1.0