盐胁迫下大麦酵母双杂交文库的构建与鉴定

• 作者: 刘成洪 宗营杰 李颖波 杜志钊 王亦菲 许建华 陆瑞菊 黄剑华
• 来源期刊: 上海农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 盐胁迫 大麦 酵母双杂交 cDNA文库
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 所属期刊栏目: 遗传育种·分子遗传学
• 页码范围: 1-5
• 页数: 5页
• 分类号: S512.3|Q78
• 字数: 3573字
• 语种: 中文
• DOI: 10.15955/j.issn1000-3924.2019.06.01

摘要

为研究盐胁迫下大麦耐盐相关蛋白的互作蛋白,利用Gateway技术构建盐胁迫下大麦的酵母双杂交文库.首先提取受盐胁迫的大麦总RNA,分离mRNA并合成双链cDNA,并通过位点特异重组系统(BP重组)将双链cDNA转入pDONR22载体,构建初级文库.然后,将初级文库质粒通过同源重组转入pGADT7-DEST载体,构建次级文库.最后,将次级文库质粒转入酵母菌株Y187中构建酵母双杂交文库.经鉴定,该酵母双杂交文库的滴度为7.0×107 CFU/mL,插入cDNA片段平均长度大于1 000 bp,重组率大于95.8％.所构建的酵母双杂交文库质量较高,可用于后续的互作蛋白筛选工作.