尼罗罗非鱼PPARδ的原核表达及其多抗制备和纯化

• 作者: 冯鹏霏 张永德 潘传燕 罗洪林
• 来源期刊: 福建农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 尼罗罗非鱼 PPARδ 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2019,（9）
• 所属期刊栏目: 动物科学
• 页码范围: 1053-1058
• 页数: 6页
• 分类号: S917.4
• 字数: 4463字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19303/j.issn.1008-0384.2019.09.009

摘要

[目的]为研究尼罗罗非鱼过氧化物酶体增殖物激活受体δ(PPARδ)的表达情况,通过大肠杆菌表达系统表达PPARδ,纯化重组蛋白并获得多克隆抗体.[方法]对PPARδ进行生物信息学分析后设计特异性引物,扩增PPARδ,将其克隆至原核表达载体pET-B2m中,构建重组表达载体;重组质粒转入大肠杆菌B21并用IPTG进行诱导表达,用SDS-PAGE鉴定表达产物.用镍柱纯化重组蛋白后免疫日本大耳兔制备多克隆抗体,用间接ELISA技术检测抗体效价,Western Blot鉴定抗体的特异性.[结果]成功构建了原核表达载体pET-B2m-PPARδ,实现了重组蛋白的原核表达和纯化,重组蛋白以包涵体蛋白和可溶性蛋白2种形式存在,分子量约为90 kD;制备的多克隆抗体效价为1∶2 048 000,Western Blot检测结果表明该抗体能特异性识别尼罗罗非鱼PPARδ.[结论]成功实现了尼罗罗非鱼PPARδ重组蛋白的融合表达,在大肠杆菌中高效表达后纯化重组蛋白,免疫日本大耳兔获得了效价高、特异性强的多克隆抗体,为尼罗罗非鱼PPARδ的功能研究奠定了基础.