邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯对INS-1细胞氧化应激和凋亡的影响

• 作者: 刘雨薇 厉曙光 吴岷 李奕明 秦晋 陈波
• 来源期刊: 环境与职业医学
• 学科: 医学
• 关键词: 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 胰岛β细胞 氧化应激 线粒体膜电位 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2019,（4）
• 所属期刊栏目: 专栏:邻苯二甲酸脂的健康效应
• 页码范围: 327-332
• 页数: 6页
• 分类号: R114
• 字数: 5052字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13213/j.cnki.jeom.2019.18635

摘要

[目的]邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)是一种具有代表性的邻苯二甲酸酯类增塑剂,常被用于塑料制品的生产加工,暴露来源广泛.有流行病学证据表明DEHP暴露与糖尿病的发生发展有一定关联,但鲜见相关基础研究.本研究探究DEHP对大鼠胰岛β细胞(INS-1细胞)氧化应激及细胞凋亡的影响.[方法]体外培养INS-1细胞,并用30、60、120 μmol/L的DEHP处理24h.用MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率.用2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)检测细胞内活性氧(ROS)含量,可溶性噻唑盐(WST-8)法检测细胞内超氧化物过氧歧化酶(SOD)活性,5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)比色法检测还原型谷胱甘肽(GSH)及氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量,硫代巴比妥酸(TBA)法检测脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量,用JC-1检测线粒体膜电位.用60、120、240 μmol/L的DEHP作用于INS-1细胞24h后,用Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、细胞色素C(Cyt-C)、Caspase-3、Caspase-9的表达.[结果] MTT实验和细胞凋亡检测结果显示,DEHP可导致INS-1细胞的增殖抑制,且120μmol/LDEHP还会引起凋亡(P＜0.05).与对照组相比,30、60、120 μmol/L的DEHP可造成INS-1细胞内ROS荧光强度分别增强13.9％、20.7％和33.7％,MDA含量分别增加42.9％、44.8％和67.7％(P＜0.01);60、120μmol/L的DEHP可造成细胞内GSH含量分别下降9.2％和54.8％,GSSG含量分别增加101.2％和444.1％,且还原型与氧化型谷胱甘肽的比值GSH/GSSG分别下降54.8％和91.7％ (P＜ 0.05);120 μmol/L的DEHP可造成SOD活性降低26.4％ (P＜ 0.05);30、60、120 μmol/L的DEHP可导致INS-1细胞线粒体膜电位降低,由此引起红绿荧光比值分别降低10.6％、36.8％和38.4％ (P＜0.01).Western blot结果显示,与对照组相比,60、120、240μmol/L的DEHP染毒组中,Cyt-C相对表达量增加;120、240 μmol/L DEHP组Bax/Bcl-2值升高;240 μmol/LDEHP组Caspase-9和Capase-3相对表达量也增加(P＜0.05).[结论]DEHP可引起INS-1细胞氧化应激,降低线粒体膜电位,激活细胞凋亡线粒体通路相关蛋白的表达,诱导细胞凋亡.