禽腺病毒4型SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立

• 作者: 于可响 亓丽红 刘涛 宋玲玲 王友令 艾武 袁小远 鞠艳 马秀丽
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 禽腺病毒 血清型4 实时荧光定量PCR 检测
• 年，卷（期）: 2019,（8）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 118-122
• 页数: 5页
• 分类号: S852.65
• 字数: 3548字
• 语种: 中文

摘要

禽腺病毒4型(FAdV-4)是心包积水综合征的重要病原.本研究拟建立FAdV4荧光定量PCR检测方法,为FAdV4感染的流行病学调查、早期诊断、疫病净化提供技术手段.根据GenBank中的禽腺病毒4型六邻体(hexon)基因序列,设计一对引物,扩增hexon基因,将目的基因与载体pEASY-T3连接,构建重组阳性质粒pEAST-T3-H,利用所制备的质粒pEAST-T3-H为模板,对PCR反应体系、反应条件进行优化.建立了禽腺病毒4型SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法,检出的标准品的敏感性为1.7×10拷贝/μL,优于常规的PCR检测方法.该方法与其他禽病病毒均无交叉反应.表明该方法具有特异型强、灵敏度高、重复性好的特点,可用于临床样本的检测.