重组人骨形成蛋白-2基因工程菌株的构建及蛋白复性纯化

• 作者: 凌沛学 刘英梅 刘金明 刘霞 刘飞 张秀华 王凤山 陈勉
• 来源期刊: 食品与药品
• 学科: 医学
• 关键词: 人骨形成蛋白2 大肠杆菌 包涵体 复性 纯化 生物活性
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 337-342
• 页数: 6页
• 分类号: R915
• 字数: 4343字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-979X.2019.05.001

摘要

目的 构建一株高效表达人骨形成蛋白2(hBMP-2)的基因工程菌株,并通过复性、纯化获得有生物活性的rhBMP-2.方法 采用基因工程法将hBMP-2基因片段与pET-28a(+)质粒载体相连,构建大肠杆菌表达系统.工程菌发酵后,超声破碎收集包涵体,包涵体经裂解后通过稀释复性法进行复性,SDS-PAGE检测复性情况,并采用HiTrap Heparin HP纯化,C2C12细胞检测活性.结果 rhBMP-2在大肠杆菌中以无活性的包涵体形式表达,1 L发酵罐高密度发酵rhBMP-2包涵体湿重可达20 g/L.采用稀释法复性,蛋白复性率大于40％,亲和层析纯化后,二聚体蛋白纯度达95％以上,且能诱导C2C12细胞碱性磷酸酶的表达,具有同市售产品相同的细胞活性.结论 成功构建了高效表达rhBMP-2的基因工程菌株,复性方法简单且无需对包涵体进行纯化,蛋白复性浓度高,纯化方法简便,大大降低了工业化生产成本.