重组人骨靶向干扰素γ-1b在大肠杆菌中的表达

• 作者: 付加芳 宗工理 曹广祥 李俊玲 王世立 王志宇
• 来源期刊: 罕少疾病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 干扰素γ-1b 骨靶向系统 原核表达 纯化 骨硬化症
• 年，卷（期）: 2019,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 50-52
• 页数: 3页
• 分类号: R34
• 字数: 2948字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-3257.2019.04.018

摘要

目的 建立人骨靶向干扰素γ-1b的高效原核表达体系.方法 从Drug Bank数据库下载人干扰素γ-1b氨基酸序列,在羧基端加上10个天冬氨酸标签作为骨靶向分子.采用大肠杆菌偏爱密码子,DNA Star软件分析获得骨靶向性干扰素γ-1b的基因序列.人工合成基因序列并克隆入pET3c质粒表达载体.将上述pET3c-rhIFNγ-1b-D10重组表达载体转入大肠杆菌BL21,筛选高效表达菌株.分离包涵体,8mol/L尿素溶解,利用镍柱亲和层析纯化重组蛋白.Western blot检测目的蛋白的特异性表达.结果 测序结果显示所克隆的骨靶向rhIFNγ-1b基因序列正确,筛选出高效表达菌株.经SDS-PAGE显示在相对分子质量19KD处出现特异的目的蛋白表达带,表达量约占全菌蛋白的30％.表达产物以包涵体形式存在,8mol／L尿素变性后经镍柱亲和层析纯化,纯度大于90％,浓度为0.8mg/mL.Western检测显示在19KD处出现特异性目的条带.结论 成功在大肠杆菌中表达了人骨靶向干扰素γ-1b,为研究其生物学活性及用于骨硬化症的治疗奠定基础.