LHRH介导的TAT蛋白核心肽PTD的制备及跨膜研究

• 作者: 余晓颖 刘雨玲 吴广谋 岳玉环 张国利 李泽鸿 杨雯棋 田园 陈云雨 马洪圆
• 来源期刊: 黑龙江畜牧兽医（上半月）
• 学科: 农学
• 关键词: 核心肽 转促黄体激素释放激素 目的蛋白 转导效率 绿色荧光 跨膜
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 8-12,175
• 页数: 6页
• 分类号: S814.1|Q524+.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.13881/j.cnki.hljxmsy.2018.03.0250

摘要

为了研究促黄体激素释放激素(LHRH)介导的TAT蛋白核心肽PTD的跨膜作用,测定目的蛋白的转导效率,试验以pET28a-PTD-GFP质粒为模板,设计含LHRH基因序列的特异性PCR引物,经PCR扩增后双酶切,并克隆到原核表达载体pET28a中,构建重组质粒并在E.coli BL21(DE3)感受态细胞中诱导表达,超声破碎后进行硫酸铵梯度沉淀,取上清液用Phenyl-HP疏水层析柱和Q阴离子交换层析柱纯化,将纯化后的目的蛋白加到体外培养的HeLa细胞中,观察转导情况,分析目的蛋白浓度对转导效率的影响.结果表明:PCR扩增得到目的基因LHRH-PTD-GFP,并成功构建出重组质粒pET28a-LHRH-PTD-GFP,在E.coli BL21 (DE3)感受态细胞中成功诱导表达出目的蛋白,经Phenyl-HP疏水层析柱和Q阴离子交换层析柱成功纯化出目的蛋白,在荧光显微镜下HeLa细胞内显现明显的绿色荧光,经分析转导效率与目的蛋白浓度之间呈正相关,回归系数为0.096 6,决定系数(R2)为0.937 8.说明LHRH介导的TAT蛋白核心肽PTD具有很好的跨膜特性,转导效率对目的蛋白浓度具有依赖性,在一定浓度范围内随着目的蛋白浓度的增加转导效率增大.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李泽鸿		65	401	12.0	17.0
2	田园		4	0	0.0	0.0
3	马洪圆		2	0	0.0	0.0
4	岳玉环		2	0	0.0	0.0
5	张国利		2	0	0.0	0.0
6	吴广谋		2	0	0.0	0.0
7	刘雨玲		2	0	0.0	0.0
8	余晓颖		3	0	0.0	0.0
9	杨雯棋		2	0	0.0	0.0
10	陈云雨		1	0	0.0	0.0