鲤春病毒血症病毒截短糖蛋白的原核表达及抗体制备

• 作者: 任广明 刘淼 卢彤岩 徐黎明 林婧楠 赵景壮
• 来源期刊: 淡水渔业
• 学科: 农学
• 关键词: 鲤春病毒血症病毒 糖蛋白 抗血清制备 细胞免疫荧光
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 页码范围: 44-50
• 页数: 7页
• 分类号: S941.41
• 字数: 5307字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-6907.2019.05.007

摘要

以鲤春病毒血症病毒(Spring Virernia of Carp Virus,SVCV)shlj1分离株基因组RNA为模板,利用RT-PCR扩增获得SVCV糖蛋白(Glycoprotein,G)部分基因序列(420 bp),克隆至pET-32a原核表达载体,构建重组质粒pET-32a-G;将重组质粒转入大肠杆菌Rosetta表达菌株,利用SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)对截短G蛋白的表达及纯化情况进行检测;将纯化的G蛋白免疫小鼠制备鼠抗血清,采用酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和细胞间接免疫荧光抗体试验(Indirect fluorescent antibody test,IFAT)对抗血清进行鉴定.SDS-PAGE结果显示该重组截短G蛋白与预期大小相符(约为35 kDa),以包涵体的形式表达;ELISA结果显示,制备的鼠抗截短G蛋白血清效价为1:80000;IFAT结果显示,抗血清能够识别不同地区的SVCV分离株(黑龙江省3株,辽宁省2株),在FITC标记的羊抗鼠IgG作用下,呈特异性绿色荧光.结果表明,制备的截短SVCV G蛋白具有良好的免疫原性,利用其所制备的抗体能够识别我国不同SVCV分离株病毒表面天然结构的糖蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	卢彤岩		150	1526	19.0	31.0
2	徐黎明	中国水产科学研究院黑龙江水产研究所	26	65	5.0	6.0
3	赵景壮	中国水产科学研究院黑龙江水产研究所	17	33	4.0	5.0
4	刘淼	中国水产科学研究院黑龙江水产研究所	12	33	4.0	5.0
5	任广明	中国水产科学研究院黑龙江水产研究所	7	6	2.0	2.0