羊口疮病毒127基因的克隆表达及亚细胞定位分析

• 作者: 俞赵荣 刘自敏 张学琪 李永东 杨侃侃 王元红 王勇 白彩霞 蒋书东 钟灵毓 鲁智敏
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 羊口疮病毒 ORFV127基因 原核表达 亚细胞定位
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医·水产养殖
• 页码范围: 646-652
• 页数: 7页
• 分类号: S855.3
• 字数: 4610字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2019.03.020

摘要

为了对羊口疮病毒(ORFV) AH-F10株127基因进行原核表达及亚细胞定位,本试验采用PCR方法扩增出ORFV127基因,成功构建原核表达重组质粒pGEX-6p-1-O RFV127和真核重组质粒pEGFP-N 1-O RFV127.将原核表达重组质粒转化到大肠埃希氏菌中表达,并进行纯化和鉴定.以纯化的蛋白质免疫BALB/c雌鼠制备多克隆抗体,利用Western-blot技术鉴定其反应原性.利用脂质体介导法将重组质粒pEGFP-N1-ORFV127转染至Vero细胞,通过倒置荧光显微镜观察其在细胞中的表达及亚细胞定位.结果 表明,获得的ORFV127基因序列全长为558bp,ORFV127蛋白在大肠杆菌中获得高效表达,主要以包涵体蛋白质的形式表达,大小约49 000.Western-blot结果显示,免疫小鼠获得的抗ORFV127蛋白的多克隆抗体可特异性识别ORFV127蛋白,倒置荧光显微镜观察发现,ORFV127蛋白主要定位于细胞质.本试验结果为后续研究ORFV127蛋白的功能提供了宝贵的生物材料.