沙门菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立

• 作者: 刘鸿博 包仁龙 向莹 宋宏彬 张浩然 杜昕颖 杨超杰 田赛 谢靖 邱少富 郭卫光
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 沙门菌 荧光定量PCR TaqMan探针
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 805-809,816
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 字数: 4283字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2019.06.014

摘要

目的:建立一种可快速检测沙门菌的实时荧光定量PCR方法,对粪便、海鲜等样本中的沙门菌进行检测.方法:根据沙门菌ompF基因的特异性序列设计引物和TaqMan探针,建立检测沙门菌的实时荧光定量PCR快速检测方法,对方法的特异性、敏感性和稳定性进行评价,并对临床样本中的沙门菌进行检测.结果:该检测方法可扩增不同型别沙门菌的基因组DNA,对其他10种不含沙门菌的肠道病原菌基因组DNA均不扩增,具有很好的特异性;对构建的阳性质粒模板检测灵敏度可达0.1 ng/L,对菌株样本基因组DNA检测灵敏度为10 CFU/mL,可快速准确地检出临床样本中分离的沙门菌阳性菌株,且与商业化沙门菌检测试剂盒的阳性检出率相同;该方法的重复性也很高,5次重复实验Ct值的变异系数低于0.8％.结论:建立的沙门菌TaqMan实时荧光定量PCR法具有简单快速、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点,可应用于临床沙门菌核酸检测.