鲤春病毒血症病毒糖蛋白酵母表面展示系统的建立

• 作者: 任广明 刘淼 卢彤岩 徐黎明 林婧楠 赵景壮
• 来源期刊: 水生生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 鲤春病毒血症病毒 糖蛋白 酵母表面展示系统 流式细胞仪
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 页码范围: 977-982
• 页数: 6页
• 分类号: Q786
• 字数: 4359字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7541/2019.116

摘要

糖蛋白(Glycoprotein,G)作为鲤春病毒血症病毒(Spring Virernia of Carp Virus,SVCV)主要的抗原蛋白,已成为现阶段SVCV病毒检测、抗体制备以及疫苗研制的热点.为了对其进行酵母表面展示,研究以SVCV-shlj1分离株基因组为模板,通过RT-PCR技术,体外扩增获得SVCV表面糖蛋白的基因开放阅读框(1530 bp)片段,将其克隆至酵母表面展示载体pYD1,构建重组质粒pYD1-G.利用电转化方法将重组质粒pYD1-G导入酿酒酵母EBY100感受态细胞,经YNB选择培养基筛选和菌液PCR的鉴定,挑选出阳性转化子(命名为EBY100-pYD1-G),对其进行2％半乳糖诱导.利用细胞免疫荧光和流式细胞仪检测G蛋白的酵母表面展示情况.细胞免疫荧光结果显示,诱导后的酵母细胞EBY100-pYD1-G能产生特异性红色荧光,且随着诱导时间的增加,红色荧光的酵母细胞所占比例不断增加,各组之间差异显著(P<0.05).流式细胞仪检测结果显示,酵母细胞的荧光强度与诱导时间呈正比,其中诱导48h与72h的酵母细胞荧光强度不存在显著差异,基本趋于稳定不变的状态.因此,选取诱导48h为酵母表面展示的最佳诱导时间.上述研究结果表明SVCV的G蛋白已经成功展示于酿酒酵母细胞表面,研究为鲤春病毒血症酵母口服疫苗的研发奠定了前期基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	卢彤岩	中国水产科学研究院黑龙江水产研究所	150	1526	19.0	31.0
2	徐黎明	中国水产科学研究院黑龙江水产研究所	26	65	5.0	6.0
3	赵景壮	中国水产科学研究院黑龙江水产研究所	17	33	4.0	5.0
4	刘淼	中国水产科学研究院黑龙江水产研究所	12	33	4.0	5.0
5	林婧楠	中国水产科学研究院黑龙江水产研究所	3	3	1.0	1.0
9	任广明	中国水产科学研究院黑龙江水产研究所	7	6	2.0	2.0