具有羟基化酶体系活性的重组大肠杆菌的构建

• 作者: 任聪 汪辉 练家惠 陈向东 鲍张杰
• 来源期刊: 药物生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 羟基化作用 生物转化 相容性质粒 重组大肠杆菌 表达 稳定性
• 年，卷（期）: 2019,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 95-99
• 页数: 5页
• 分类号: Q93|Q55
• 语种: 中文
• DOI: 10.19526/j.cnki.1005-8915.20190201

摘要

VD3羟化酶(VD3 Hydroxylase,VDH)是一种P450单加氧酶,属于CYP107家族,能够催化维生素D3的25位羟基化.铁氧化还原蛋白(Ferredoxin,FDX)和铁氧化还原蛋白还原酶(Ferredoxin reductase,FDR)是两个电子传递链蛋白,参与羟化反应中电子的传递.构建具有羟基化酶体系活性的重组大肠杆菌,为骨化醇类化合物的高效转化提供参考.分别构建重组质粒pETDuet-1-fdr-fdx及pACYCDuet-1-vdh,将两个相容性质粒同时转入大肠杆菌BI21(DE3)中.采用IPTG对重组大肠杆菌进行诱导,使其表达目的蛋白,利用SDS-PAGE检测其蛋白大小及可溶性.采用液体传代的方法研究质粒稳定性.酶切鉴定和测序证明重组质粒pETDuet-1-fdr-fdx及pACYC-Duet-1-vdh构建成功.SDS-PAGE结果显示目的蛋白大小与预期一致.重组大肠杆菌可以将阿法骨化醇和艾地骨化醇中间体(AD-M07)分别转化成骨化三醇和艾地骨化醇中间体(AD-M08),转化率分别为36.10％和22.87％,转化时间为12 h,比自养假诺卡氏菌缩短600％.重组大肠杆菌经传代50次,质粒稳定性达到92％以上,说明该重组大肠杆菌菌株稳定性较好.实验成功构建了具有羟基化酶体系活性的重组大肠杆菌,为高效转化阿法骨化醇和艾地骨化醇中间体(AD-M07)奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	汪辉		38	98	6.0	8.0
2	陈向东		42	230	9.0	14.0
3	任聪		4	1	1.0	1.0
4	鲍张杰		4	1	1.0	1.0
5	练家惠		3	0	0.0	0.0