Ⅱ型鲤疱疹病毒ORF121蛋白的多克隆抗体制备及鉴定

• 作者: 余琳 吕利群 王浩
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: Ⅱ型鲤疱疹病毒 ORF121 原核表达 多克隆抗体 间接免疫荧光检测
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 页码范围: 1463-1471
• 页数: 9页
• 分类号: Q511|S941.4
• 字数: 6751字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11964/jfc.20180911458

摘要

针对CyHV-2病毒ORF121基因(GenBank:AFJ20543.1)进行原核表达系统的构建,将纯化重组蛋白作为抗原来免疫BALB/c小鼠获得多克隆抗体,应用该抗体开展CyHV-2病毒诊断及其感染机制研究.以CyHV-2病毒感染细胞上清液为扩增模板,扩增ORF121基因构建至pGEX-4T原核表达载体,经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达rORF 121重组蛋白,利用尿素纯化后免疫6周龄BALB/c小鼠制备多克隆抗体.结果 显示,CyHV-2病毒ORF121基因可在原核表达系统中高效表达目的重组蛋白rORF121,经SDS-PAGE分析大小约为60 ku,主要以不可溶的包涵体存在.利用尿素溶解rORF121蛋白免疫BALB/c小鼠获得抗ORF121蛋白的多克隆抗体,Western Blot实验显示,该抗体可特异性识别CyHV-2病毒感染RyuF-2细胞样品.研究表明,利用CyHV-2感染RyuF-2细胞后,本研究制备的抗ORF121蛋白的多克隆抗体能够通过间接免疫荧光实验特异性识别CyHV-2病毒感染的细胞样品.本研究制备的抗ORF121蛋白的多克隆抗体,能够为CyHV-2病毒诊断技术的构建以及深入开展CyHV-2病毒感染机制提供良好的技术基础.