布鲁菌外膜蛋白Omp19突变体的构建及免疫原性研究

• 作者: 宰晓东 徐俊杰 李汭桦 李玉杰 李耀辉 殷瑛 王美荣 胡凯 郭凤羽 陈薇
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 医学
• 关键词: 布鲁菌 Omp19突变体 构建 免疫原性
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 589-596
• 页数: 8页
• 分类号: Q78|R392.1
• 字数: 5527字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2019.05.001

摘要

目的:构建Omp19突变体,分析突变体与Omp19在理化性质和免疫原性上的异同,初步探究Omp19序列3个半胱氨酸残基(Cys)对原蛋白的影响,为以Omp19为组分的布鲁菌亚单位疫苗研究提供依据.方法:以前期构建的含有Omp19核酸序列的质粒为模板,分别缺失或替换序列中编码Cys的碱基,并连接至原核表达载体pET32a,IPTG诱导表达并利用SPXL柱进行纯化,SDS-PAGE鉴定纯化的蛋白.利用质谱、圆二色光谱等对突变体M1、M4开展理化性质分析.ELISA法检测M1、M4免疫小鼠后产生的Omp19特异性抗体和细胞因子水平,用布鲁菌A19株攻击免疫小鼠评价免疫保护效果.结果:获得了无多余条带无多聚体的M1、M4重组蛋白.Omp19、M1、M4相对分子质量测定结果分别为31550、15804、15757,提示Omp19以二聚体形式存在;N端前6个氨基酸残基序列与理论序列一致.Omp19在1、86和106位检测到二硫键;M1在86、106位检测到二硫键;M4分子中检测不到二硫键的存在.圆二色谱结果显示Cys缺失或替换未对Omp19的二级结构造成影响.免疫实验显示,M1、M4激发的Omp19特异的抗体水平、细胞因子水平及对小鼠的保护效果与Omp19无显著性差异.结论:Cys会影响Omp19重组蛋白的制备和质控,其缺失或替换对Omp19原有的理化性质和免疫原性影响不大,突变体蛋白M1、M4作为布鲁菌亚单位疫苗的候选抗原值得进一步研究.