枯草芽孢杆菌表达载体的构建及猪源表皮生长因子的表达

• 作者: 季明月 李志辉 李聪 檀建新 肖童 董兵 陈海清
• 来源期刊: 河北农业大学学报
• 关键词: 枯草芽孢杆菌 穿梭表达载体 表面展示载体 pEGF lipaseA
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 页码范围: 71-76
• 页数: 6页
• 分类号: TS201.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.13320/j.cnki.jauh.2019.0012

摘要

本文首先以枯草芽孢杆菌(B.subtilis)穿梭载体pDG150为基础,构建了含有5个克隆位点的表达载体pTD160,并在此基础上构建了带有淀粉酶信号肽的分泌表达载体pTD161和可用于外源蛋白与胞衣蛋白cotG融合表达的表面展示载体pTD162.将脂肪酶基因lipa分别插入pTD161和pTD162,在B.subtilis 168中表达,其LipA酶活性分别为23.4 U/mg和15.3 U/mg,表明pTD载体具有良好的表达性能.通过无抗生素压力传代培养10代后,发现其稳定性仍为96.5％和95.0％,证明pTD载体具备较高的稳定性.将密码子优化后的猪源表皮生长因子基因pegf分别导人pTD161和pTD162,转化B.subtilis 168获得工程菌Bs168-pTD161-pegf和Bs168-pTD162-pegf,ELISA法证明pEGF在工程菌中表达量分别达到365 ng/mL和285 ng/mL,证明pEGF获得高效表达和展示.