拟南芥肌醇半乳糖苷合成酶与棉子糖合成酶的体外催化活性比较

• 作者: 余方回 刘妙玲 周英彪 张玲 李晓霞 范芳 郑小芬 黄迎娣 黄金兰
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 棉子糖 肌醇半乳糖苷合成酶 棉子糖合成酶 拟南芥 基因克隆 体外催化活性
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 开发与应用
• 页码范围: 69-76
• 页数: 8页
• 分类号: Q814
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2019.01.0013

摘要

[目的]基因克隆及原核表达纯化后比较拟南芥的2个肌醇半乳糖苷合成酶及2个棉子糖合成酶的体外催化活性,为微生物法或酶法合成棉子糖尊定基础.[方法] RT-PCR克隆拟南芥的肌醇半乳糖苷合成酶(GolS1及GolS3)与棉子糖合成酶(RafS1及RafS5)的基因,分别构建原核表达菌株,诱导表达纯化获得酶,电泳检测及蛋白定量后进行体外酶催化反应,HPLC分析产物.[结果]克隆到GolS1与GolS3及RafS1与RafS5的基因,原核表纯化获得纯酶,以反应体系中目标产物生成速率衡量,GolS1与GolS3催化速率分别为0.51和0.28 mmol/(mg· min),RafS1与RafS5的催化速率分别为0.45和0.21 mmol/(mg·min).[结论]拟南芥的肌醇半乳糖苷合成酶(GolS1及GolS3)与棉子糖合成酶(RafS1及RafS5)基因经异源表达后具有良好酶活,其中GolS1酶活是GolS3的1.82倍,RafS1酶活是RafS5的2.14倍.