槲皮素对非对称性二甲基精氨酸诱导损伤的脑血管内皮细胞的保护作用及其机制研究

• 作者: 任锟 张志鑫 李彦杰 赵晶 邢若星
• 来源期刊: 中国脑血管病杂志
• 关键词: 槲皮素 内皮细胞 JNK丝裂原活化蛋白激酶类 非对称性二甲基精氨酸 氧化应激
• 年，卷（期）: 2019,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 82-88
• 页数: 7页
• 字数: 5176字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-5921.2019.02.005

摘要

目的 探讨槲皮素对非对称性二甲基精氨酸(ADMA)诱导下人脑血管内皮细胞(HBMECs)损伤的保护作用及其作用机制.方法 采用ADMA(30μmol/L,作用24 h)诱导建立HBMECs损伤模型.实验分为对照组(不加任何干预因素)、ADMA组、ADMA+槲皮素处理组(加入终浓度分别为0.1、1、10、100μmol/L的槲皮素预处理2 h后再加入终浓度为30μmol/L的ADMA作用24 h)、100μmol/L槲皮素处理组(100μmol/l的槲皮素预处理2 h后换常规培养液)、10μmol/l槲皮素处理组(10μmol/L的槲皮素预处理2 h后换常规培养液)、茴香霉素(ANISO)/P79350+ADMA+槲皮素处理组[加入终浓度为10μmol/L的槲皮素预处理2 h后再加入终浓度为30μmol/L的ADMA作用24 h,实验结束前1 h加入10μmol/L的ANISO或50μmol/L的P79350]以及ANISO/P79350处理组(常规培养液培养,实验结束前1 h加入10μmol/L的NAISO或50μmol/L的P79350),每组6个样本.不同浓度槲皮素预处理2 h后,噻唑蓝法测定细胞活性,酶联免疫吸附试验法测定细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧、丙二醛、脑源性神经营养因子(BDNF)水平,Western blotting分析Bax、Bcl-2、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、磷酸化JNK(p-JNK)、p38、磷酸化p38(p-p38)表达水平,逆转录-聚合酶链式反应检测内皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA表达,caspase-3活性试剂盒检测caspase-3活性,应用JNK激动剂ANISO和p38激动剂P79350观察JNK/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路在槲皮素介导的细胞损伤保护中的作用.结果 与对照组比较,ADMA组HBMECs活性(52±8)明显降低,LDH水平(356±28)显著升高,BDNF浓度(51±8)明显下降,差异均有统计学意义(均P<0.05);与ADMA组比较,ADMA+10μmol/L槲皮素处理组和ADMA+100μmol/L槲皮素处理组HBMECs细胞活性显著改善(分别为80±5、86±7),LDH水平明显下调(分别为162±20、141±17),BDNF浓度明显增加(分别为82±5、94±6),差异均有统计学意义(均P<0.05).应用10μmol/L的槲皮素处理进行后续实验,结果显示,与ADMA组比较,ADMA+槲皮素处理组Bcl-2 mRNA、eNOS mRNA和SOD水平均明显升高(分别为0.75±0.10、0.81±0.07、81±10),Bax表达水平和caspase-3活性、活性氧、丙二醛水平均明显减低(分别为1.63±0.12、1.85±0.16、169±16、159±13),差异均有统计学意义(均P<0.05).进一步机制分析表明,与对照组比较,ADMA组可显著提高HBMECs中JNK和p38的磷酸化水平(p-JNK/JNK和p-p38/p38分别为3.46±0.32、3.66±0.31);与ADMA组比较,ADMA+槲皮素处理组有效抑制了ADMA诱导下HBMECs的JNK和p38磷酸化水平(p-JNK/JNK和p-p38/p38分别为2.60±0.19、2.72±0.20),差异均有统计学意义(均P<0.05);与ADMA+槲皮素处理组比较,ANISO+ADMA+槲皮素处理组p-JNK/JNK(4.06±0.30)和P79350+ADMA+槲皮素处理组p-p38/p38(3.84±0.32)明显增高,两组细胞活性和BDNF水平明显降低,LDH水平明显增加,差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 槲皮素可缓解ADMA诱导的HBMECs损伤,其机制可能与抑制JNK/p38 MAPK信号通路有关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李彦杰	河南省中医院康复科	38	137	6.0	11.0
2	赵晶	河南省中医院康复科	13	19	2.0	4.0
3	任锟	河南省中医院康复科	19	51	3.0	7.0
4	张志鑫	河南省中医院康复科	10	14	2.0	3.0
5	邢若星	河南省中医院康复科	9	15	2.0	3.0