米黑根毛霉脂肪酶基因的酵母重组表达和Kex2位点改造

• 作者: 冯凤琴 李杨 毛建卫 沈灵智 蔡海莺 赵敏洁
• 来源期刊: 中国食品学报
• 关键词: 米黑根毛霉脂肪酶 重组表达 毕赤酵母 密码子优化 sn-1,3位置专一性
• 年，卷（期）: 2019,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 85-91
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.16429/j.1009-7848.2019.04.010

摘要

米黑根毛霉脂肪酶(RML)具有较高的合成活性、热稳定性、溶剂耐受性以及sn-1,3位置专一性等一系列适合工业化推广的特点.本研究通过密码子优化改造RML编码基因,并将其克隆、转化到毕赤酵母GS115菌株,经诱导发酵156 h,酶活达到3.77 U/mL.为了进一步改善RML脂肪酶的重组表达,通过定点突变的方式去掉潜在的Kex2酶切位点,结果显示:RML突变体表达量均显著低于野生型的RML脂肪酶,表明“-Arg196-Arg197-”序列并不影响RML的重组表达.通过对RML蛋白结构分析,Kex2酶切位点的肽键被包埋在蛋白内部,这表明该住点区域的折叠在进入分泌途径时已基本完成.本研究对异源蛋白的酵母重组表达具有一定参考价值.