马铃薯甲虫RNA干扰高效致死基因的筛选

• 作者: 丁新华 付开赟 何江 吐尔逊·艾合买提 徐晴玉 米热古丽·胡尔西达 郭文超
• 来源期刊: 新疆农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 马铃薯甲虫 RNA干扰 致死基因 dsRNA LD50
• 年，卷（期）: 2019,（7）
• 所属期刊栏目: 土壤肥料·贮藏加工·植物保护·畜牧水产
• 页码范围: 1277-1287
• 页数: 11页
• 分类号: S435.32
• 字数: 5915字
• 语种: 中文
• DOI: 10.6048/j.issn.1001-4330.2019.07.012

摘要

[目的]基于备选基因RNA干扰后的致死效果评价,筛选出高效致死基因.[方法]通过在赤拟谷盗中已的报导和相似性搜索获得马铃薯甲虫致死基因Ldpp1 alpha-96a、LdRpt3、Ldalpha snap、LdSrp54k、LdRpn6、LdRop、LdGawky、Ldshi、Ldcact、Ldinr-a,以及阳性对照基因LdA TPaseA和LdATPaseE,构建dsRNA表达载体,经饲喂马铃薯甲虫二龄幼虫不同浓度的dsRNA,分析对幼虫的20％取食剂量AD20、化蛹中量PD50和幼虫7d致死中量LD50,经分析和评估,筛选出高效致死基因.[结果]12个基因的dsRNA对马铃薯甲虫幼虫的AD20在1.18±0.10(μg/mL) ～ 61.07 ±10.17(μg/ mL);PD50在0.06 ±0.01(μg/ mL) ～ 31.20 ±1.89(μìg/mL);LD50在1.39 ±0.13(μg/mL) ～ 228.13 ±6.72(μg/mL).其中AD20最高与最低的基因分别为Ldinra、LdRpn6;PD50最高与最低的基因分别为Ldinr-a、LdGawky;LD0最高与最低的基因分别为Ldinr-a、Ldsrp54k.[结论]12个基因的dsRNA对马铃薯甲虫幼虫均有一定的抑制取食、抑制化蛹及致死活性.其致死活性随浓度增高而增大,表现出剂量依赖效应,与对照组存在显著差异.通过综合比较AD20和LD50,Ldalpha snap、LdRpn6、LdSrp54k、LdRpt3个基因的毒力较ATPaseE和ATPaseA更强,具有较高的生物活性.提出并推荐AD20和LD50是评价备选基因dsRNA对幼虫致死效果的关键指标.