人miR-331-3p慢病毒表达载体的构建及其在HER-2阳性乳腺癌细胞中的表达

• 作者: 丁进亚 艾翠方 黄前川
• 来源期刊: 华南国防医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 乳腺癌 微小RNA 人表皮生长因子2 慢病毒
• 年，卷（期）: 2019,（12）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 803-806
• 页数: 4页
• 分类号: R737.9
• 语种: 中文
• DOI: 10.13730/j.issn.1009-2595.2019.12.001

摘要

目的 构建miR-331-3p慢病毒表达载体,并检测其在人表皮生长因子2(human epidermal growth factor receptor 2,HER-2)高表达乳腺癌细胞系SKBR3中的表达情况.方法 根据miR-331-3p基因序列设计并合成1对miR-331-3p的oligo DNA,退火形成双链与pcDNA6.2-GW/EmGFP-rniR载体相连后扩增,将扩增产物GFP-miR-331-3p与pLenti6.3-MCS/V5 DEST连接构建慢病毒表达载体pLenti6.3-miR-331-3p;用脂质体将pLenti6.3-miR-331-3p及包装质粒共转染293T细胞形成Lenti-miR-331-3p,收集上清Lenti-miR-331-3p后感染293T细胞株进行滴度鉴定;将Lenti-miR-331-3p转染HER-2高表达乳腺癌细胞SKBR3,荧光显微镜观察荧光阳性细胞百分率,实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qPCR)检测miR-331-3p表达水平.结果 经PCR扩增测序证实,成功构建携带人miR-331-3p 慢病毒表达载体Lenti-miR-331-3p,并测得滴度＞109 TU/ml;荧光显微镜下SKBR3的荧光阳性率＞90％,qPCR检测证实miR-331-3p转染SKBR3后获得了高表达.结论 成功构建人miR-331-3p慢病毒表达载体,并可在乳腺癌细胞SKBR3高效表达,为后续验证miR-331-3p靶向调控癌基因HER-2的表达和功能奠定了实验基础.