橡胶树炭疽菌CsHog1基因的克隆和原核表达分析

• 作者: 何其光 刘文波 刘耀 周晓韵 廖小淼 张宇 徐良向 林春花 缪卫国
• 来源期刊: 热带作物学报
• 学科: 农学
• 关键词: 橡胶树 橡胶树炭疽菌 Hog1基因 蛋白纯化 原核表达
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 植物病理、作物病虫害及其防治
• 页码范围: 932-938
• 页数: 7页
• 分类号: S794.1
• 字数: 5116字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2561.2019.05.014

摘要

HOG MAPK途径在植物病原真菌生长发育、致病过程和对杀菌剂敏感性等方面发挥重要功能,但在不同的病原真菌中具有一定差异.为研究Hog1蛋白在橡胶树炭疽菌(Colletotrichum siamense)中的功能和调控机制,本研究利用同源克隆法克隆获得橡胶树炭疽菌(C.siamense)的CsHog1基因,构建GST-CsHog1融合表达载体,利用SDS-PAGE和Western Blot检测蛋白表达情况.结果表明:橡胶树炭疽菌(C.siamense)的CsHog1基因大小1383 nt,编码459个氨基酸,包含5个内含子,具有丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶催化结构域;聚类分析显示橡胶树炭疽菌的CsHog1基因编码的氨基酸序列与黄瓜炭疽菌的ClOsc1(Hog1同源基因)同源性最高.所构建的蛋白融合表达载体在供试条件下(IPTG 0.3、0.5、0.8、1.0 mmol/L;温度16、25、28℃)均可较好诱导表达,GST-CsHog1融合蛋白大小约为70 ku.用GST亲和层析柱纯化获得蛋白,经Western Blot检测显示该蛋白可与GST单克隆抗体特异性结合.