牦牛SIRT3基因的克隆及其在各组织和睾丸不同发育阶段的表达

• 作者: 佟连鑫 李键 殷实 王斌 秦文昌
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 组蛋白去乙酰化 SIRT3 牦牛 组织表达谱 睾丸
• 年，卷（期）: 2019,（12）
• 所属期刊栏目: 生物技术与繁殖
• 页码范围: 2431-2439
• 页数: 9页
• 分类号: S823.85
• 字数: 5233字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2019.12.007

摘要

旨在克隆牦牛沉默蛋白调节因子 3(sirtuin 3,SIRT3)基因,并检测其在牦牛不同组织及不同年龄睾丸中的表达水平,从而为研究 SIRT3在把牛睾丸发育过程中的作用机制提供试验依据.本研究选取胎牛期刊～6个月)、幼年期(1～2岁)、性成熟期(3～5岁)及老年期(7～9岁)健康雄性牦牛共 12头(每组各 3 头),其中来源于同一年龄阶段的 3个组织样本视为生物学重复.采集性成熟期牦牛肝、心、肺、脾、脑、肾、肌肉、小肠、睾丸和大肠以及 4个时期的睾丸组织.分别提取各组织的总 RNA,并利用反转录 PCRC reverse transcription PCR,RT-PCR)技术克隆获得牦牛 SIRT3基因序列,使用相关生物信息学软件预测其编码蛋白质的结构和功能;通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测 SIRT3 mRNA在牦牛各组织及睾丸 4个发育阶段的表达水平.结果表明,SIRT3基因的 ORF(open reading frame,开放阅读框)为 1 002 bp,编码 333个氨基酸,与黄牛和绵羊的同源性分别达到 99.9％和 96.7％,该基因的 mRNA在牦牛的各个组织中广泛表达,在脾、睾丸、肺和肌肉中的表达量较高.随年龄增长 SIRT3 mRNA在牦牛睾丸中表达呈现先上升后下降的趋势,其中在性成熟期的表达量最高.本研究为揭示 SIRT3在牦牛生长发育,尤其是睾丸发育过程中的调控提供了一定的基础数据.