灰飞虱内生病毒HiPV外壳蛋白VP1多克隆抗体的制备及在病毒检测中的应用

• 作者: 周益军 朴君 朴敬爱 李硕 许春玲
• 来源期刊: 昆虫学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 灰飞虱 HiPV病毒 VP1基因 原核表达 多克隆抗体 病毒检测
• 年，卷（期）: 2019,（7）
• 所属期刊栏目: 病理与微生物
• 页码范围: 823-829
• 页数: 7页
• 分类号: Q966
• 字数: 6386字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16380/j.kcxb.2019.07.005

摘要

[目的]前期发现水稻条纹病毒(rice stripe virus,RSV)可与介体灰飞虱Laodelphax striatellus 体内的HiPV病毒(Himetobi P virus,HiPV)互作.本研究旨在制备HiPV外壳蛋白VP1的多克隆抗体,并评估其在HiPV病毒检测中的可用性,以为深入研究HiPV-RSV和HiPV-灰飞虱的互作机制提供技术支持.[方法]以RT-PCR方法从灰飞虱成虫体内扩增HiPV主要外壳蛋白基因VP1,然后将VP1基因亚克隆至原核表达载体pET-32a中,构建表达载体pET-VP1.将重组质粒转化大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3),经IPTG诱导、Ni2+-NTA亲和层析纯化,获得重组蛋白,免疫新西兰大白兔,制备抗体.[结果]从灰飞虱体内克隆到774 bp的HiPV外壳蛋白基因VP1,经原核表达、纯化,获得分子量约47.5 kD的融合蛋白,免疫新西兰大白兔后获得VP1多克隆抗体.该抗体间接ELISA效价达1:819 200,与HiPV外壳蛋白VP1有特异性反应,而与灰飞虱蛋白无交叉反应.利用该多克隆抗体建立了检测单头灰飞虱成虫体内HiPV的Western blot和免疫捕获RT-PCR方法,检测结果显示HiPV在携带和不携带RSV的灰飞虱高亲和性群体内均广泛存在.[结论]利用制备的HiPV的VP1多克隆抗体可特异性检测灰飞虱体内HiPV.本研究为HiPV病毒的快速检测以及HiPV-RSV互作、HiPV-灰飞虱互作研究提供了技术支持.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周益军	江苏省农业科学院植物保护研究所	119	1884	25.0	37.0
2	朴敬爱	辽宁师范大学生命科学学院	18	52	4.0	7.0
3	朴君	辽宁师范大学生命科学学院	18	52	4.0	7.0
4	李硕	江苏省农业科学院植物保护研究所	3	47	2.0	3.0
5	许春玲	辽宁师范大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0