轮状病毒VP7糖蛋白基因的克隆及在毕赤酵母菌中的表达及免疫原性的分析

• 作者: 王红涛 肖智
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 医学
• 关键词: 轮状病毒(RV) 糖蛋白 毕赤酵母菌 动物免疫
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 人类病毒研究论著
• 页码范围: 770-776
• 页数: 7页
• 分类号: R373.2|R511
• 语种: 中文
• DOI: 10.13242/j.cnki.bingduxuebao.003584

摘要

轮状病毒(Rotavirus,RV)是一种双链核糖核酸病毒,属于呼肠孤病毒科,流行病学调查显示,轮状病毒是秋冬季引起婴幼儿感染性腹泻的重要致病因子,全世界每年有大约一亿人感染该病毒.目前,研制安全有效的疫苗是控制轮状病毒感染的重要手段之一.本研究通过基因克隆和重组技术检测20份患儿的粪便标本,提取病毒RNA,再逆转录为cDNA,根据GenBank中发表的VP7全序列设计引物,应用RT-PCR技术,从分离的轮状病毒中扩增出来960bp特异性目的片段,并构建融合表达载体pPICZαA-VP7,转入GS115毕赤酵母中.经1％甲醇诱导,镍柱亲和层析蛋白纯化,获得浓度为0.65mg/mL单一目的蛋白,经SDS-PAGE和Western Blot分析VP7蛋白的表达.结果 显示克隆的VP7基因与预计的糖蛋白基因大小一致,构建的重组表达载体在GS115毕赤酵母中表达出分子质量约34kD重组糖蛋白,说明成功克隆和表达了轮状病毒的糖蛋白基因.经小鼠免疫实验结果表明,VP7蛋白加强免疫2周后,肌注组(IM)和滴鼻组(IN)小鼠IgG抗体几何平均滴度分别达到492和676,滴鼻组SIgA平均几何滴度达到43.5,可产生高水平的IFN-γ,表明VP7蛋白免疫可以有效地诱导机体产生细胞免疫,具有进一步开发研究的价值.