cdh5-mRNA在野生型斑马鱼胚胎发育过程中的表达模式

• 作者: 何志旭 刘庆 吴西军 姚冬静 杨小燕 王一慧 王念雪 舒莉萍
• 来源期刊: 贵州医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 斑马鱼 胚胎发育 cdh5基因 基因表达 遗传载体 全胚胎原位杂交
• 年，卷（期）: 2019,（11）
• 所属期刊栏目: 专题研究
• 页码范围: 1241-1246
• 页数: 6页
• 分类号: R318.1|Q95-33
• 字数: 3592字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19367/j.cnki.1000-2707.2019.11.001

摘要

目的:探讨cdh5-mRNA在野生型斑马鱼胚胎期发育过程中的表达模式.方法:收取tuebingen野生型斑马鱼多个发育时间节点的胚胎,提取其总RNA,体外逆转录后RT-PCR扩增cdh5基因片段,将cdh5基因片段插入pCS2+质粒载体中,挑选阳性单克隆菌落,通过双酶切、测序等方法鉴定pCS2+-cdh5重组质粒;重组质粒单酶切后用T3RNA体外转录体系制备地高辛标记的cdh5基因的反义mRNA探针,对斑马鱼全胚胎进行原位杂交,显微镜下观察各发育节点胚胎cdh5-mRNA杂交信号并拍照.结果:构建并鉴定了pCS2+-cdh5重组质粒,各发育节点胚胎经全胚胎原位杂交后发现在tuebingen野生型斑马鱼胚胎发育至3.7～12 hpf时cdh5-mRNA呈低丰度泛在表达,18 ～ 36 hpf时在后脑及血管处表达、在造血系统高表达,48 hpf后仅在脑部和血管处低表达.结论:在野生型斑马鱼胚胎期发育过程中可以检测到cdh5-mRNA在后脑和血管处有表达,并且在造血组织高表达.